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肖thest

木虫 (小有名气)

神级

引用回帖:
9楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 19:56:54
你好像是学临床的吧?

外科的,在读博。
thest
11楼2013-12-22 20:01:28
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woshishui916

木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 肖thest at 2013-12-22 20:01:11
好的,我就直接合成引物了,谢谢您,然后pcr之后测序。我前面自己设计的结果blast都还不错,但是退火温度从45-65℃摸,就是不行。因为刚才用您的引物blast没成功,不知道是不是我哪里弄错了。...

但有一点哦,你上面给的是基因组序列就没问题。一般情况下不怎么用blast;不会有问题;
单如果你给的cDNA或者mRNA之类的,就不行哦。
要是你扩增不出来,告诉我下,我给你个程序,基本没问题。
12楼2013-12-22 20:04:18
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woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有啊,你可以把你设计的引物发下,我看看,指不定你不用重新合成。别浪费40块钱哈
13楼2013-12-22 20:05:30
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肖thest

木虫 (小有名气)

神级

引用回帖:
9楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 19:56:54
你好像是学临床的吧?

您看我的用primer blast和blastn的结果
求助引物设计:前前后后三次都有问题,请大神帮帮忙…………感激不尽
QQ图片20131222200412.jpg


求助引物设计:前前后后三次都有问题,请大神帮帮忙…………感激不尽-1
QQ图片20131222200457.jpg


求助引物设计:前前后后三次都有问题,请大神帮帮忙…………感激不尽-2
QQ图片20131222200546.jpg

thest
14楼2013-12-22 20:06:50
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woshishui916

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 肖thest at 2013-12-22 20:01:28
外科的,在读博。...

我想想就是
慢慢来,既然你选了分子,有问题的时候,刚好我空,可以给我站内信,你我这么盖楼,很不礼貌的了
15楼2013-12-22 20:07:03
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肖thest

木虫 (小有名气)

神级

引用回帖:
13楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 20:05:30
还有啊,你可以把你设计的引物发下,我看看,指不定你不用重新合成。别浪费40块钱哈

第一对:
F1(20bp):GACGGATCTCTCTCCGACCT
R1(21bp):CTTCACCAGCTCCATGTCGAT
第二对:
F1:GCGCCCATCTAGGTTATTTCCG
R1:CCAGCCAGTTTCTTCTGCCAGTC
常规的设计的过程我都懂,这个基因把我搞的头都大
thest
16楼2013-12-22 20:09:13
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woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 肖thest at 2013-12-22 20:09:13
第一对:
F1(20bp):GACGGATCTCTCTCCGACCT
R1(21bp):CTTCACCAGCTCCATGTCGAT
第二对:
F1:GCGCCCATCTAGGTTATTTCCG
R1:CCAGCCAGTTTCTTCTGCCAGTC
常规的设计的过程我都懂,这个基因把我搞的头都大...

不盖楼了哈
给你站内消息了
17楼2013-12-22 20:19:13
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肖thest

木虫 (小有名气)

神级

引用回帖:
17楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 20:19:13
不盖楼了哈
给你站内消息了...

好的。问一句,如果用你的引物是不是按照常规的也可以?
thest
18楼2013-12-22 20:28:19
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woshishui916

木虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 肖thest at 2013-12-22 20:28:19
好的。问一句,如果用你的引物是不是按照常规的也可以?...

你这个基因扩增难度在于buffer;和引物关系不是特别大;
我上面的引物没有了你单条引物的而具体,彼此的Tm比较接近;从参数来说,会好一些。
19楼2013-12-22 20:31:30
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肖thest

木虫 (小有名气)

神级

引用回帖:
19楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-12-22 20:31:30
你这个基因扩增难度在于buffer;和引物关系不是特别大;
我上面的引物没有了你单条引物的而具体,彼此的Tm比较接近;从参数来说,会好一些。...

好的,那我买GC高的buffer基本上没问题吧,您说的条件我们实验室很难,只有一台普通pcr仪器
thest
20楼2013-12-22 20:36:32
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