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肖thest

木虫 (小有名气)

神级

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2655.7
散金: 5
帖子: 209
在线: 52.9小时
虫号: 1343978
注册: 2011-07-12
专业: 味觉、口颌面疼痛、咬合及

[求助] 求助引物设计：前前后后三次都有问题，请大神帮帮忙…………感激不尽已有2人参与

共1067bp，粗线是我需要看的基因区域，想设计一对引物，普通PCR后测序（单向测，所以上游或者下游引物离目标区域起码60bp），用primer或者NCBI primer blast设计了三次，每次引物特异性较差或者退火温度摸不出来。
下面是我的序列：
TGAGACTTTT CCGTTGCCGC TGGGAGCCGG AGGCGCGGGG ACCTCTTGGC GCGACGCTGC
CCCGCGAGGA GGCAGGACTT GGGGACCCCA GACCGCCTCC CTTTGCCGCC GGGGACGCTT
GCTCCCTCCC TGCCCCCTAC ACGGCGTCCC TCAGGCGCCC CCATTCCGGA CCAGCCCTCG
GGAGTCGCCG ACCCGGCCTC CCGCAAAGAC TTTTCCCCAG ACCTCGGGCG CACCCCCTGC
ACGCCGCCTT CATCCCCGGC CTGTCTCCTG AGCCCCCGCG CATCCTAGAC CCTTTCTCCT
CCAGGAGACG GATCTCTCTC CGACCTGCCA CAGATCCCCT ATTCAAGACC ACCCACCTTC
TGGTACCAGA TCGCGCCCAT CTAGGTTATT TCCGTGGGAT ACTGAGACAC CCCCGGTCCA
AGCCTCCCCT CCACCACTGC GCCCTTCTCC CTGAGGACCT CAGCTTTCCC TCGAGGCCCT
CCTACCTTTT GCCGGGAGAC CCCCAGCCCC TGCAGGGGCG GGGCCTCCCC ACCACACCAG
CCCTGTTCGC GCTCTCGGCA GTGCCGGGGG GCGCCGCCTC CCCCATGCCG CCCTCCGGgc
tgcggctgct gcCgctgctgcta ccgctgctgt ggctactggt gctgACGCCT GGCCGGCCGG CCGCGGGACT
ATCCACCTGC AAGACTATCG ACATGGAGCT GGTGAAGCGG AAGCGCATCG AGGCCATCCG
CGGCCAGATC CTGTCCAAGC TGCGGCTCGC CAGCCCCCCG AGCCAGGGGG AGGTGCCGCC
CGGCCCGCTG CCCGAGGCCG TGCTCGCCCT GTACAACAGC ACCCGCGACC GGGTGGCCGG
GGAGAGTGCA GAACCGGAGC CCGAGCCTGA GGCCGACTAC TACGCCAAGG AGGTCACCCG
CGTGCTAATG GTGGAAACCC ACAACGGTGA GCTCGGAGGG GCAGGGGAGC CGGGAGGGGG
GCCCCCAGGG GGCGCCGGAG TGCCGGGGCC ACGGGTAGGA AGTGACTGGC AGAAGAAACT
GGCTGGAGGA AGAGGACACC CCGGGGCAAA GGGA

[ Last edited by 肖thest on 2013-12-22 at 13:43 ]

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thest

1楼 2013-12-22 13:42:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Dr.G

新虫 (初入文坛)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 61.8
帖子: 13
在线: 4.8小时
虫号: 2872883
注册: 2013-12-15
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

PCR仪可以梯度的话，建议梯度PCR试一下，试试能不能扩出你要的条带

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28楼2013-12-22 23:58:07

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woshishui916

木虫 (著名写手)

应助: 15 (小学生)
金币: 8210.8
散金: 70
红花: 3
帖子: 1798
在线: 301.9小时
虫号: 335922
注册: 2007-03-31
性别: GG
专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肖thest: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 很感激，很nice的人 2013-12-22 23:13:55
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:45:26

上游：AAGCCTCCCCTCCACCACTG
下游：CCGCAGCTTGGACAGGATCT
肯定能出来
出不来你再联系我

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