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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计一对荧光定量的引物
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sls19881024

银虫 (小有名气)

[求助] 设计一对荧光定量的引物 已有3人参与

atgatgcgcctctcgcgcgccgtgccgcgcccctccgctgccaagctcgcagcccgcaactcgcgcggctacgtcgttgcgtcgcagacgcaccgcgcctccgaggccaagggctaccccgtcatcgaccacgagttcgatgccgtcgtcgttggtgctggtggtgctggtctccgtgctgccttcggtctcgccgagggtggtctcaagaccgcgtgtatctccaagctcttccccactaggagtcacaccgtcgctgcccagggtggcatcaacgccgcactcggcaacatgaccgaggacgactggaggtggcacatgtacgacacagtcaagggttccgactggctcggcgaccaggacgccatccactacatgacccgcgaggctcctcgcaccgtcatcgaggtgagttgcgagcagcagcagcagcagcagcagcagcagcactgcacgcgcacaaacgaagaacccgcactgaccctcttttttttccgccctcgccagctcgagcactacggtctccccttctcgcgtaccaaggagggcaagatctaccagcgtgccttcggtggtcagtcgctcaactacggcaagggcggccaggcctaccgctgcgccgccgctgctgaccgtaccggccacgccatgcttcactcgctctacggccagtcgctccgccacaacaccaacttcttcatcgagtactttgccctcgacctgctgatgcaggacggcgagtgtgtcggtgtcattgccctcaacatggaggacggcaccctccaccgcttccgctcgcacaagactgtcctcgccaccggcggctacggtcgtgcctacttctcgtgcacttcggcccacacctgctcgggtgacggcaacgccatggtcgtccgtgccggcctccccctccaggacctcgagttcgtccagttccaccccaccggtatctacggctcgggatgtctcatcaccgagggtgcccgtggtgagggtggctacctcctcaactcgaacggtgagcgcttcatggagcgttacgcccccaccgccaaggaccttgcctcgcgtgacgtcgtctcgcgttccatgaccctcgagatccgtgagggccgtggtgttggccccgagaaggaccacatctacctccagctctcgcaccttccccccgacattctccacgagcgtctgcccggtatctccgagaccgccgccatcttcgccggtgtcgacgtcaccaaggagcccatccccgtcctccccaccgtccactacaacatgggcggtatccccaccaagtacactggtgaggttatcaccgtcgacgagaacggcaaggacaaggtcgtccccggtctctacgccgccggtgaggccgcctgtgtctcggtccacggtgccaaccgtctcggtgccaactcgctccttgacattgtcgtcttcggccgtgcttgcgccaaccacatcaaggagaaccttgcccccaacaccccccacaagcctcttgacgactcgctcggccaggcttccatcgagaacctcgagaagatccgtacctcgaacggccctctccacacctcgaccatccgtctcaacatgcagaagaccatgcagaaggacgctgccgtcttccgtacccaggagtcgcttgacgacggtgtccgtggcatgaccgaggtctacaagacctacgaccaggtcggcatcaaggaccgctccctcatctggaactcggacctcatcgagaccctcgagctccgcaacatcatgcagaacgccatccagactgttgtttccgccgccgcacgcaaggagtcgcgtggtgctcacgcccgtgaggacttccccgatcgtgacgatgttgagtggcaaaagcacactttgagcttccagcacaaccccgagtctcccgaggtcgacctcaagtaccgcaaggtcatcatggagactctggacgagaacgagtgtaagacggtcccacctgccaaacgtgtaattatcaccagagataaatggcccccgagtgaagctaacatccccgcaggtgtactaaacatcgagagcgcgttgcagtatgtagcagatggaagcgcaatattgatatttgatcccgcctcaaatctctga
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小松
1楼 2014-06-27 13:50:06
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回帖置顶 ( 共有2个 )

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sls19881024: 金币+5, ★★★很有帮助, 有道理啊！谢谢！ 2014-06-29 14:43:05
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:24:21
gyesang: 回帖置顶 2014-06-29 17:26:21
一般我们不自己设计。
1、查阅相关文献，从文献中找RT引物序列
2、从http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/网站上查询，人和鼠的基本上能搞定。
3、从GeneCopoeia(国内的叫复能基因）购买，约200元每对，不提供序列
上述3中方法都不行，才自己设计。
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5楼2014-06-29 10:47:24
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taccycle

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 15:54:06
gyesang: 回帖置顶 2014-07-15 15:54:09
引用回帖:
7楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-29 11:34:52
呵呵，别人做过的事情，何必自己再做一遍呢？而且自己做得一定比别人好？曾经有个人站在巨人的肩膀上，后来他被苹果砸了。
多看文献是必须的，即使你不必为了设计引物看文献，你研究这个基因总得看相关文献吧。国 ...

千万不要迷信文献，尤其是国内的文献，扯淡的特别多，我们用过很多国内文章的PCR引物，结果很差，还是自己设计的好用，设计的原理看看文献倒是可以。
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用心
13楼2014-07-01 15:07:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sls19881024: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2014-06-29 14:42:45
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:24:09
F: CGAGAACGAGTGTAAGACGG
R: GGGATGTTAGCTTCACTCGG
Tm: 58
product: 84

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4楼2014-06-29 09:48:37
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 凌枫miracle at 2014-07-01 07:01:26
我只想说，末端gc含量太高，不好
...

好不好，楼主自己用了就知道，看一眼就知道好不好，你真神，所谓的原理，很多时候不是绝对的，学会变通，实验才会OK。

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14楼2014-07-01 15:25:26
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普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sls19881024: 金币+5, ★有帮助 2014-06-29 08:24:58
你打算做哪种qPCR，用什么试剂？

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2楼2014-06-27 19:15:00
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sls19881024

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-27 19:15:00
你打算做哪种qPCR，用什么试剂？

用的是Promega的反转录酶，SYBR用的是一个国产的试剂
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小松
3楼2014-06-29 08:24:21
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-29 10:47:24
一般我们不自己设计。
1、查阅相关文献，从文献中找RT引物序列
2、从http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/网站上查询，人和鼠的基本上能搞定。
3、从GeneCopoeia(国内的叫复能基因）购买，约200元每对，不提供 ...

自己设计也没什么难度啊，求人不如求己，查文献那会都已经设计完啦。

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6楼2014-06-29 10:50:40
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BioChen

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:24:43
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-29 10:50:40
自己设计也没什么难度啊，求人不如求己，查文献那会都已经设计完啦。
...

呵呵，别人做过的事情，何必自己再做一遍呢？而且自己做得一定比别人好？曾经有个人站在巨人的肩膀上，后来他被苹果砸了。
多看文献是必须的，即使你不必为了设计引物看文献，你研究这个基因总得看相关文献吧。国外同行大概每月看22篇文献（未必准确），以此自勉吧。
我们的分歧，其实不在真理判断，而在于价值选择。
本人三流小硕，还望以后得到Neo2000兄台教诲。
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7楼2014-06-29 11:34:52
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-29 11:34:52
呵呵，别人做过的事情，何必自己再做一遍呢？而且自己做得一定比别人好？曾经有个人站在巨人的肩膀上，后来他被苹果砸了。
多看文献是必须的，即使你不必为了设计引物看文献，你研究这个基因总得看相关文献吧。国 ...

研究的多的物种当然可以互相参考，但也未必都能直接拿来用，我研究的领域未必每个月有22篇SCI，文献阅读不可小觑，但实践出真知，当你强大了，才会看得懂别人的智慧高深。相信，每一款定量试剂或试剂盒对荧光定量的引物都有明确的说明，照做不会有太大问题，自己动手，踏实，你想要的，网上未必有。

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8楼2014-06-29 12:03:30
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sls19881024

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-29 09:48:37
F: CGAGAACGAGTGTAAGACGG
R: GGGATGTTAGCTTCACTCGG
Tm: 58
product: 84

你好，你这对引物很好    我想问一下，设计引物都用什么软件   是Primer5.0+oligo嘛？
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小松
9楼2014-06-29 14:46:31
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by sls19881024 at 2014-06-29 14:46:31
你好，你这对引物很好    我想问一下，设计引物都用什么软件   是Primer5.0+oligo嘛？...

primer-blast，好不好，做了实验才知道

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10楼2014-06-29 14:54:54
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