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tsf741014

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量引物问题 已有2人参与

我做荧光定量,想先检验下引物能不能用,直接找个样品荧光定量就可以看出引物可不可以用了么?还是需要电泳或是测序,测序的目的是什么?请高手指教,一窍不通?
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古韵清音

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-21 00:39:54
tsf741014: 金币+5, 有帮助 2013-12-23 12:55:22
一般只要不是同源性太大的基因,跑出来熔解曲线是单峰的话就是可以的,不放心的话就跑个胶看看了,测序应该不需要吧,你设计的时候应该是ncbi上blast过的啊
2楼2013-12-20 20:50:08
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tsf741014

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 古韵清音 at 2013-12-20 20:50:08
一般只要不是同源性太大的基因,跑出来熔解曲线是单峰的话就是可以的,不放心的话就跑个胶看看了,测序应该不需要吧,你设计的时候应该是ncbi上blast过的啊

自己不会设计,所以设计是找公司设计的,他说没有对比特异性,测序目的是看特异性么?
3楼2013-12-20 20:52:28
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古韵清音

银虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-21 00:40:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by tsf741014 at 2013-12-20 20:52:28
自己不会设计,所以设计是找公司设计的,他说没有对比特异性,测序目的是看特异性么?...

是的,你可以引物先去blast一下,特异性好的话没必要测序。建议你去了解点荧光定量的基本知识那
4楼2013-12-20 22:18:30
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achonghello

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 21:04:42
跑一次PCR,跑胶看一下是否为单一条带,而且看一下目的条带是否跟理论值一致
没必要测序。。。。
5楼2013-12-21 14:47:00
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