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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量引物问题
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tsf741014

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量引物问题已有2人参与

我做荧光定量，想先检验下引物能不能用，直接找个样品荧光定量就可以看出引物可不可以用了么？还是需要电泳或是测序，测序的目的是什么？请高手指教，一窍不通？
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1楼2013-12-20 20:47:39
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古韵清音

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-21 00:39:54
tsf741014: 金币+5, ★有帮助 2013-12-23 12:55:22
一般只要不是同源性太大的基因，跑出来熔解曲线是单峰的话就是可以的，不放心的话就跑个胶看看了，测序应该不需要吧，你设计的时候应该是ncbi上blast过的啊
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2楼2013-12-20 20:50:08
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tsf741014

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 古韵清音 at 2013-12-20 20:50:08
一般只要不是同源性太大的基因，跑出来熔解曲线是单峰的话就是可以的，不放心的话就跑个胶看看了，测序应该不需要吧，你设计的时候应该是ncbi上blast过的啊

自己不会设计，所以设计是找公司设计的，他说没有对比特异性，测序目的是看特异性么？
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3楼2013-12-20 20:52:28
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古韵清音

银虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-21 00:40:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by tsf741014 at 2013-12-20 20:52:28
自己不会设计，所以设计是找公司设计的，他说没有对比特异性，测序目的是看特异性么？...

是的，你可以引物先去blast一下，特异性好的话没必要测序。建议你去了解点荧光定量的基本知识那
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4楼2013-12-20 22:18:30
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achonghello

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:04:42
跑一次PCR，跑胶看一下是否为单一条带，而且看一下目的条带是否跟理论值一致
没必要测序。。。。
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5楼2013-12-21 14:47:00
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