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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量，怎么验证引物效率呢
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Alex_J_Xu

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量，怎么验证引物效率呢 已有2人参与

荧光定量，怎么验证引物效率呢！  因为扩增的不好，像看一下引物效率
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1楼 2013-12-16 21:41:15
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Alex_J_Xu(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2013-12-17 09:56:47
做一个标准曲线，根据曲线的斜率可以算出你的引物的扩增效率
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2楼2013-12-16 21:49:49
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Alex_J_Xu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-16 21:49:49
做一个标准曲线，根据曲线的斜率可以算出你的引物的扩增效率

谢谢啦！可是没有定量的模版，做不了标曲吧。能否用跑胶，看条带浓度呢？
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3楼2013-12-16 22:31:07
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-17 09:56:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by Alex_J_Xu at 2013-12-16 22:31:07
谢谢啦！可是没有定量的模版，做不了标曲吧。能否用跑胶，看条带浓度呢？...

不需要知道模板的确切的量，只需要做一系列的梯度稀释就可以啊，比如你确定好第一个浓度为N，第二个可以为十分之一 N，第三个为百分之一 N，以此类推，
你说的那个标准曲线是绝对定量的标曲，如果只是测试引物扩增效率不用知道起始浓度
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Alex_J_Xu
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4楼2013-12-16 23:56:00
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gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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一般机器跑完的时候都会给出引物的扩增效。
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5楼2013-12-17 08:37:27
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Alex_J_Xu

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-16 23:56:00
不需要知道模板的确切的量，只需要做一系列的梯度稀释就可以啊，比如你确定好第一个浓度为N，第二个可以为十分之一 N，第三个为百分之一 N，以此类推，
你说的那个标准曲线是绝对定量的标曲，如果只是测试引物扩增 ...

7500可以实现吗？在哪里呢？新手，非常感谢
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6楼2013-12-17 14:18:35
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Alex_J_Xu at 2013-12-17 14:18:35
7500可以实现吗？在哪里呢？新手，非常感谢...

既然是新手建议将realtime PCR的原理做一个彻底的了解，你自然就知道了，做标准曲线跟机器没有关系
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2013-12-18 11:25:10
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