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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做转化的菌长得很好，为什么PCR的条带不是我想要的
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邊緣人灬

新虫 (初入文坛)

[求助] 做转化的菌长得很好，为什么PCR的条带不是我想要的 已有2人参与

最近做转化，菌都长得很好，负对照做了没长菌，但是PCR时得到的是200bp左右的条带，但是我要的是680左右的条带。什么状况啊？求大神解。
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1楼 2014-07-28 17:38:19
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:54:58
邊緣人灬: 金币+5, ★有帮助 2014-08-01 08:33:51
一般是载体自连的产物，建议挑菌用特异性引物再扩增一次试试
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2楼2014-07-28 18:24:00
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:55:08
载体自连，目的基因没有插入。

你用的是亚克隆载体么？如果是的话，可以做个蓝白斑筛选，挑白斑做PCR，顺利的话成功率应该在90%以上。
蓝斑是空载体，可以挑一个作对照组pcr，应该会得到你现在的200bp条带。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
3楼2014-07-28 19:03:33
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gayy1990602

铜虫 (初入文坛)
是的，看看是不是自连，单酶切可能性很大，还有即使有对照，PCR的话会有污染，外来基因，也出现过。
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4楼2014-08-12 10:35:29
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