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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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天湖酒

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做质粒扩增诱变pcr 结果正确,但是转化进入感受态不长菌,为何? 已有2人参与

我质粒模板有7Kbp,PCR后电泳条带正确,用Dpn1消化了3小时(也做了对照),直接转化,取100uL涂布,结果对照跟实验组都没有长菌,感受态也没有问题,我转的纯质粒长菌了,我再想线性DNA转化有什么特别要注意的地方吗?
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:37:19
DNA片段转进感受态你觉得能表达么?又不是做基因敲除,好歹连个载体再转。。。
Someone
2楼2014-04-11 12:04:59
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:37:26
你不用DpnI处理看看行不行,你用的是什么感受态细胞,这个菌株里面有RecA么?这个要注意的。
另外ia,实在不行的话在体外做次overlap再转进细胞吧。
3楼2014-04-11 13:08:22
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天湖酒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-11 13:08:22
你不用DpnI处理看看行不行,你用的是什么感受态细胞,这个菌株里面有RecA么?这个要注意的。
另外ia,实在不行的话在体外做次overlap再转进细胞吧。

我就是用的JM109

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-12 19:54:05
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