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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我做质粒扩增诱变pcr 结果正确，但是转化进入感受态不长菌，为何？
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天湖酒

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做质粒扩增诱变pcr 结果正确，但是转化进入感受态不长菌，为何？ 已有2人参与

我质粒模板有7Kbp,PCR后电泳条带正确，用Dpn1消化了3小时（也做了对照），直接转化，取100uL涂布，结果对照跟实验组都没有长菌，感受态也没有问题，我转的纯质粒长菌了，我再想线性DNA转化有什么特别要注意的地方吗？
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1楼 2014-04-11 11:09:51
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:37:19
DNA片段转进感受态你觉得能表达么？又不是做基因敲除，好歹连个载体再转。。。
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Someone
2楼2014-04-11 12:04:59
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-11 14:37:26
你不用DpnI处理看看行不行，你用的是什么感受态细胞，这个菌株里面有RecA么？这个要注意的。
另外ia，实在不行的话在体外做次overlap再转进细胞吧。
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3楼2014-04-11 13:08:22
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天湖酒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-11 13:08:22
你不用DpnI处理看看行不行，你用的是什么感受态细胞，这个菌株里面有RecA么？这个要注意的。
另外ia，实在不行的话在体外做次overlap再转进细胞吧。

我就是用的JM109

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4楼2014-04-12 19:54:05
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