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关于质粒扩增和感受态转化
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看了各种感受态细胞转化的步骤，其中有一步转化以后要37度摇床，1个小时。可是当时的容器不应该是1.5mlEP管么，怎么摇床呢？细菌生长要空气，这样岂不是要开盖子，不会摇出来么?而且怎么保证无菌呢？ 另外，质粒是点在滤纸上面的。是要用无菌水溶下来就可以了么？要不要加热65度？50ul水好像溶不了那么大的滤纸吧。。大概取多少转化呢？还是先测浓度再算？ 谢谢！！！ |
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第一个问题： 一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖子盖紧，怎么放怎么摇都可以，摇30-45min就可以了 第二个问题： 质粒点在滤纸上，把点质粒的那个区域剪下来塞在EP管里面，用无菌水50ul(或者更小体积)溶解并离心下来，然后取适量（多取少取都可以，不放心的话，你可以多取点10ul？）转化就可以了。不用测浓度，质粒的转化效率很高，感受态熱激后甚至可以不用加LB摇直接涂板都可以 |
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