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关于质粒扩增和感受态转化
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看了各种感受态细胞转化的步骤,其中有一步转化以后要37度摇床,1个小时。可是当时的容器不应该是1.5mlEP管么,怎么摇床呢?细菌生长要空气,这样岂不是要开盖子,不会摇出来么?而且怎么保证无菌呢? 另外,质粒是点在滤纸上面的。是要用无菌水溶下来就可以了么?要不要加热65度?50ul水好像溶不了那么大的滤纸吧。。大概取多少转化呢?还是先测浓度再算? 谢谢!!! |
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gyesang
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第一个问题: 一般感受态100-150ul,熱激后,冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul,这些都是在1.5mL EP中,EP管可以插在浮漂中,然后放入摇床,要盖上盖子,不用考虑空气的问题。至于怎么摇,怎么放,只要你将盖子盖紧,怎么放怎么摇都可以,摇30-45min就可以了 第二个问题: 质粒点在滤纸上,把点质粒的那个区域剪下来塞在EP管里面,用无菌水50ul(或者更小体积)溶解并离心下来,然后取适量(多取少取都可以,不放心的话,你可以多取点10ul?)转化就可以了。不用测浓度,质粒的转化效率很高,感受态熱激后甚至可以不用加LB摇直接涂板都可以 |

2楼2013-04-23 13:30:44
senix
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