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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒扩增和感受态转化
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒扩增和感受态转化

看了各种感受态细胞转化的步骤，其中有一步转化以后要37度摇床，1个小时。可是当时的容器不应该是1.5mlEP管么，怎么摇床呢？细菌生长要空气，这样岂不是要开盖子，不会摇出来么?而且怎么保证无菌呢？

另外，质粒是点在滤纸上面的。是要用无菌水溶下来就可以了么？要不要加热65度？50ul水好像溶不了那么大的滤纸吧。。大概取多少转化呢？还是先测浓度再算？

谢谢！！！
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1楼 2013-04-23 13:10:43
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-23 20:44:29
xjtu0025: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-24 11:15:48
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖子盖紧，怎么放怎么摇都可以，摇30-45min就可以了

第二个问题：
质粒点在滤纸上，把点质粒的那个区域剪下来塞在EP管里面，用无菌水50ul(或者更小体积)溶解并离心下来，然后取适量（多取少取都可以，不放心的话，你可以多取点10ul？）转化就可以了。不用测浓度，质粒的转化效率很高，感受态熱激后甚至可以不用加LB摇直接涂板都可以
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2楼2013-04-23 13:30:44
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senix

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-23 13:30:44
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖 ...

正解！
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做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-04-23 16:44:14
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-23 19:07:32
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xjtu0025

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-23 13:30:44
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖 ...

在问细节一点~不要介意呀..
你说EP管插在浮板中意思就是只要EP不乱跑就行了对吧~

主要是我的质粒跟别的老师借的,那老师心疼的不得了,我完全第一次做,他各种不放心什么的.我们实验室也没人做过..做过的师姐师兄都毕业走人了..
以前遇到的质粒都是已经在扩增菌株中的了.

还有一个问题,那个加了AMP,倒好板的LB固如果放在紫外下面找的话AMP会失效么?
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5楼2013-04-24 11:19:22
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gyesang

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引用回帖:
5楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-24 11:19:22
在问细节一点~不要介意呀..
你说EP管插在浮板中意思就是只要EP不乱跑就行了对吧~

主要是我的质粒跟别的老师借的,那老师心疼的不得了,我完全第一次做,他各种不放心什么的.我们实验室也没人做过..做过的师姐师兄 ...

你说EP管插在浮板中意思就是只要EP不乱跑就行了,应该是这样，乱跑到不要紧，只要能让它摇起来就行

加了AMP,倒好板的LB固如果放在紫外下面照，AMP会不会失去抗性这个具体没有实验过，但最好不好放UV下面照，总归这样不好

如果还有问题，私信我

[ Last edited by gyesang on 2013-4-24 at 17:26 ]
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6楼2013-04-24 17:25:43
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