应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒扩增和感受态转化
51/1返回列表
查看: 3885  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xjtu0025

新虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒扩增和感受态转化

看了各种感受态细胞转化的步骤，其中有一步转化以后要37度摇床，1个小时。可是当时的容器不应该是1.5mlEP管么，怎么摇床呢？细菌生长要空气，这样岂不是要开盖子，不会摇出来么?而且怎么保证无菌呢？

另外，质粒是点在滤纸上面的。是要用无菌水溶下来就可以了么？要不要加热65度？50ul水好像溶不了那么大的滤纸吧。。大概取多少转化呢？还是先测浓度再算？

谢谢！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 宝贝里

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-23 13:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjtu0025

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-23 13:30:44
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖 ...

在问细节一点~不要介意呀..
你说EP管插在浮板中意思就是只要EP不乱跑就行了对吧~

主要是我的质粒跟别的老师借的,那老师心疼的不得了,我完全第一次做,他各种不放心什么的.我们实验室也没人做过..做过的师姐师兄都毕业走人了..
以前遇到的质粒都是已经在扩增菌株中的了.

还有一个问题,那个加了AMP,倒好板的LB固如果放在紫外下面找的话AMP会失效么?
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-24 11:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-23 20:44:29
xjtu0025: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-24 11:15:48
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖子盖紧，怎么放怎么摇都可以，摇30-45min就可以了

第二个问题：
质粒点在滤纸上，把点质粒的那个区域剪下来塞在EP管里面，用无菌水50ul(或者更小体积)溶解并离心下来，然后取适量（多取少取都可以，不放心的话，你可以多取点10ul？）转化就可以了。不用测浓度，质粒的转化效率很高，感受态熱激后甚至可以不用加LB摇直接涂板都可以
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-04-23 13:30:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

senix

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-23 13:30:44
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖 ...

正解！
回复此楼
做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-04-23 16:44:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-23 19:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭