应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒扩增和感受态转化
51/1返回列表
查看: 3890  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xjtu0025

新虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒扩增和感受态转化

看了各种感受态细胞转化的步骤，其中有一步转化以后要37度摇床，1个小时。可是当时的容器不应该是1.5mlEP管么，怎么摇床呢？细菌生长要空气，这样岂不是要开盖子，不会摇出来么?而且怎么保证无菌呢？

另外，质粒是点在滤纸上面的。是要用无菌水溶下来就可以了么？要不要加热65度？50ul水好像溶不了那么大的滤纸吧。。大概取多少转化呢？还是先测浓度再算？

谢谢！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 宝贝里

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-23 13:10:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-04-24 11:19:22
在问细节一点~不要介意呀..
你说EP管插在浮板中意思就是只要EP不乱跑就行了对吧~

主要是我的质粒跟别的老师借的,那老师心疼的不得了,我完全第一次做,他各种不放心什么的.我们实验室也没人做过..做过的师姐师兄 ...

你说EP管插在浮板中意思就是只要EP不乱跑就行了,应该是这样，乱跑到不要紧，只要能让它摇起来就行

加了AMP,倒好板的LB固如果放在紫外下面照，AMP会不会失去抗性这个具体没有实验过，但最好不好放UV下面照，总归这样不好

如果还有问题，私信我

[ Last edited by gyesang on 2013-4-24 at 17:26 ]
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-04-24 17:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-23 20:44:29
xjtu0025: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-24 11:15:48
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖子盖紧，怎么放怎么摇都可以，摇30-45min就可以了

第二个问题：
质粒点在滤纸上，把点质粒的那个区域剪下来塞在EP管里面，用无菌水50ul(或者更小体积)溶解并离心下来，然后取适量（多取少取都可以，不放心的话，你可以多取点10ul？）转化就可以了。不用测浓度，质粒的转化效率很高，感受态熱激后甚至可以不用加LB摇直接涂板都可以
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-04-23 13:30:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

senix

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-23 13:30:44
第一个问题：
一般感受态100-150ul，熱激后，冰上放3-5分钟后加入LB 培养基600-750ul，这些都是在1.5mL EP中，EP管可以插在浮漂中，然后放入摇床，要盖上盖子，不用考虑空气的问题。至于怎么摇，怎么放，只要你将盖 ...

正解！
回复此楼
做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-04-23 16:44:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-23 19:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 18:58 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 15:33 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 14:33 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭