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mingming1990

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR 2△△Ct法,阴性对照与目标基因PCR后产物的溶解曲线和跑胶条带几乎一样? 已有1人参与

各位大神:
       第一次发帖,十分紧急!麻烦帮忙回答一下以下问题:
       个人做RT-PCR 荧光实时相对定量,用的是 2△△Ct法,但是阴性对照NTC与加了模板的目标基因PCR后产物的溶解曲线和跑胶条带几乎一样
       而且:①目标基因与NTC的Ct值仅相差不到5;②NTC的溶解曲线起峰单一且高度与目标基因相近;③琼脂糖跑胶结果,两者条带亮度与位置也几乎相同。
       个人使用的是一次性无菌枪头,勤换PE手套,操作台为超净台,PCR扩增体系也更换过,今天还重新订了引物重新稀释(以防引物已被污染),但情况没有好转。
       有人说可能是污染,让我订滤芯枪头看情况是否好转。 请问,污染可能只污染目标基因么?因为我的目标基因P有这个问题,但是管家基因G就没有这个问题,都是一个板子做出来的。
       具体情况在图上,希望各位大神多多提意见!谢谢!

RT-PCR 2△△Ct法,阴性对照与目标基因PCR后产物的溶解曲线和跑胶条带几乎一样?
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RT-PCR 2△△Ct法,阴性对照与目标基因PCR后产物的溶解曲线和跑胶条带几乎一样?-1
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RT-PCR 2△△Ct法,阴性对照与目标基因PCR后产物的溶解曲线和跑胶条带几乎一样?-2
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zulingling

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-24 22:02:21
我的情况跟你一样,找不到污染的原因,什么都换了新的,后来换了新的荧光定量试剂盒就好了
2楼2014-07-24 21:13:15
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