24小时热门版块排行榜    

查看: 1420  |  回复: 13

godloveplum

金虫 (小有名气)

[求助] 基因全长克隆 已有4人参与

我想克隆基因的全长,但是我不知道基因全长的准确序列,只是有通过同源性比较基因组得出的假定的序列,用假定序列设计引物后,没有P出条带来,希望有经验的前辈能给予指点,不胜感激!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Nothingisimpossibleforawillingheart!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

青青草allan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
godloveplum(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:56:50
godloveplum: 金币+3, 有帮助 2014-08-02 09:15:55
godloveplum: 金币+5, 有帮助 2014-08-02 09:17:39
先找到和你的实验标本亲缘关系较近的物种中该基因的全长,然后根据该基因全长设计引物,扩增出一个中间片段,然后根据你扩出的中间片段,分别设计3‘和5’RACE引物,用RACE试剂盒扩出3‘和5’端全长,最后拼接在一起得到该基因的全长。
爱出者爱返,福往者福来
5楼2014-07-15 14:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

冉兆星

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的难道不是模式生物吗?
2楼2014-07-13 14:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红尘客栈

木虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币-1, 应助指数-1, 屏蔽内容, 抄袭 2014-07-13 19:21:28
本帖内容被屏蔽

3楼2014-07-13 15:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

godloveplum

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 冉兆星 at 2014-07-13 14:52:23
你用的难道不是模式生物吗?

不是的
Nothingisimpossibleforawillingheart!
4楼2014-07-14 12:15:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

godloveplum

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-07-15 14:28:30
先找到和你的实验标本亲缘关系较近的物种中该基因的全长,然后根据该基因全长设计引物,扩增出一个中间片段,然后根据你扩出的中间片段,分别设计3‘和5’RACE引物,用RACE试剂盒扩出3‘和5’端全长,最后拼接在一起 ...

非常感谢!
Nothingisimpossibleforawillingheart!
6楼2014-07-15 15:11:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoxue1216

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-07-15 14:28:30
先找到和你的实验标本亲缘关系较近的物种中该基因的全长,然后根据该基因全长设计引物,扩增出一个中间片段,然后根据你扩出的中间片段,分别设计3‘和5’RACE引物,用RACE试剂盒扩出3‘和5’端全长,最后拼接在一起 ...

我是把基因的片段都扩出来了,包括中间片段,race5’和race3’,也设了引物,用的模板是测序返回来的质粒,但是就是拼接不上去,想问一下引物有什么要求吗,是片段两两加进去 还是三段片段一起加进去
7楼2014-07-15 16:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by godloveplum at 2014-07-15 15:11:53
非常感谢!...

不客气,祝一切顺利!
爱出者爱返,福往者福来
8楼2014-07-15 21:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by piaoxue1216 at 2014-07-15 16:43:05
我是把基因的片段都扩出来了,包括中间片段,race5’和race3’,也设了引物,用的模板是测序返回来的质粒,但是就是拼接不上去,想问一下引物有什么要求吗,是片段两两加进去 还是三段片段一起加进去...

5’端和3’端全长都得到了吗?你说拼接不上去,意思是不是得到的各个片段间都没有重叠序列?
爱出者爱返,福往者福来
9楼2014-07-15 21:38:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoxue1216

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-07-15 21:38:25
5’端和3’端全长都得到了吗?你说拼接不上去,意思是不是得到的各个片段间都没有重叠序列?...

是的,都得到了,各个片段之间也有重叠的,现在是有一些能拼接上去,但是会产生错配,跟之前扩出的片段有点不一样,甚至出现了移位,你们拼接是先用软件拼接,然后设引物,用cDNA扩出全长吗
10楼2014-07-23 16:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 godloveplum 的主题更新
信息提示
请填处理意见