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Crescendo铁杆木虫 (著名写手)
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已知cds序列如何设计引物克隆全长
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如题。 已知其cds序列（GenBank: AF402771），打算克隆到pgR107 载体上。如何设计引物获得全长。谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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silicare: 金币+4, BioEPI+1 2013-09-16 14:41:49
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Crescendo: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2013-09-16 22:09:43
| 引物设计很简单，74-1321为cds，先设计一对扩增此片段的普通引物18-25bp左右，然后加上酶切位点和保护碱基，比如PGR106上的是Cla I和Sal I 吧（PGR107比106就是一个酶切位点的差距，你自己查查看）上游引物就加上Cla I的序列和保护碱基CCATCGAT，下游引物就加上Sal I的序列和保护碱基ACGCGTCGAC（仅举个例子，你要看你的具体情况）。要是在ＮＣＢＩ ｂｌａｓｔ引物的话，要把酶切位点序列和保护碱基序列去掉以后再ｂｌａｓｔ。引物设计遵循一般引物的设计规则。 |
5楼2013-09-16 11:27:51
咆哮的白菜
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jennifermatt
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