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yuguiyan至尊木虫 (文坛精英)
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扩增基因CDS区域如何设计引物？
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| 请问欲扩增基因CDS区域然后连接载体转染入细胞内表达，引物如何设计？我看到有人说上游引物在起始密码子前照抄20个左右，这是什么意思啊 ？ |
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zhlf1989513
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-24 13:49:17
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-24 13:49:17
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楼主这是最基础的东西你咋都不懂呢？？？ 1、在NCBI上找到该基因的CDS区。 2、直接复制到premier里面（记住直接复制）。 3、设计引物。上游即是从第一个碱基开始数，17到24个bp都行；下游引物即是从最后一个开始配对的反向的碱基序列。注意尽量避免错配、引物二聚体。 4、引物设计好以后看一下上下游的Tm值是不是相差太多。两者的Tm值最好别超过5度。 5、引物设计好以后，在NCBI里面的premier-Blast里面Blast一下，看能不能Blast出你想要的目的基因。 6、加酶切位点和保护碱基。一般参考的保护碱基为以下链接。 http://www.dxy.cn/bbs/topic/2574 ... 4%E7%A2%B1%E5%9F%BA 祝好运！！！ |
12楼2012-11-24 10:19:28
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2楼2012-11-18 21:44:39
yuguiyan
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3楼2012-11-18 21:45:18
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4楼2012-11-18 21:56:26
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5楼2012-11-22 22:28:29
lvanmorison
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6楼2012-11-22 23:02:02
yuguiyan
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7楼2012-11-23 18:48:19
lvanmorison
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8楼2012-11-23 21:00:01
yuguiyan
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9楼2012-11-23 21:29:31
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10楼2012-11-23 21:34:35