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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增基因CDS区域如何设计引物？
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
19楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-25 19:26:51
哥们。。。你看一下PCR的原理就知道啦。。上游引物就是你的目的基因前面那17到25啦（不是互补）。下游引物即是与你的目的基因末端反向互补的序列啦。Genebank和FAST格式不都是一样的吗？哥们。。。你真的好好看一下 ...

加酶切位点时红色字体是必须有的，其余的前后很色字体碱基是为了调节GC含量的吗？primer-- blast验证时只输入未加酶切位点的原始引物吗？多谢啦！
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21楼2012-11-25 22:33:12
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
yuguiyan: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2012-11-28 19:55:34
引用回帖:
21楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-25 22:33:12
加酶切位点时红色字体是必须有的，其余的前后很色字体碱基是为了调节GC含量的吗？primer-- blast验证时只输入未加酶切位点的原始引物吗？多谢啦！...

加酶切位点一般你就加在5'端就行啦。。。对的。。Primer-blast验证时只输入未加酶切位点的就行。。。
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keepon
22楼2012-11-26 09:30:47
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

找到序列，找公司帮你基因合成吧
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23楼2012-11-26 10:00:44
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
23楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-26 10:00:44
找到序列，找公司帮你基因合成吧

那我还有必要在这问大家吗？
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24楼2012-11-26 19:04:30
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvanmorison at 2012-11-22 23:02:02
你是在基因组里面PCR，还是用mRNA来PCR啊？
应该是在基因的CDS序列的前后各设计一个引物，就好了吧。
我也在做这个呢

欲连接真核表达载体，设计引物时有什么药特别注意的呢？
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25楼2012-11-26 21:02:54
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
22楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-26 09:30:47
加酶切位点一般你就加在5'端就行啦。。。对的。。Primer-blast验证时只输入未加酶切位点的就行。。。...

有人说连接完T载体后可以只做菌液PCR无需双酶切即可验证，是这样的吗？
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26楼2012-11-26 22:15:08
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
26楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-26 22:15:08
有人说连接完T载体后可以只做菌液PCR无需双酶切即可验证，是这样的吗？...

菌液PCR，PCR产物去测序，双酶切验证无意义
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27楼2012-11-27 09:04:26
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
yuguiyan: 金币+1 2012-11-28 19:55:57
引用回帖:
25楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-26 21:02:54
欲连接真核表达载体，设计引物时有什么药特别注意的呢？...

ATG前面带个GCCACC
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28楼2012-11-27 09:05:08
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
28楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-27 09:05:08
ATG前面带个GCCACC...

ATG前面带个GCCACC

是什么原理啊？
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29楼2012-11-27 20:24:27
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
yuguiyan: 金币+1 2012-11-28 19:56:15
引用回帖:
29楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-27 20:24:27
ATG前面带个GCCACC

是什么原理啊？...

潜在的提高表达，详情请搜索kozak序列
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30楼2012-11-28 09:07:16
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