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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
19楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-25 19:26:51
哥们。。。你看一下PCR的原理就知道啦。。上游引物就是你的目的基因前面那17到25啦(不是互补)。下游引物即是与你的目的基因末端反向互补的序列啦。Genebank和FAST格式不都是一样的吗?哥们。。。你真的好好看一下 ...

加酶切位点时红色字体是必须有的,其余的前后很色字体碱基是为了调节GC含量的吗?primer-- blast验证时只输入未加酶切位点的原始引物吗?多谢啦!
21楼2012-11-25 22:33:12
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
yuguiyan: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2012-11-28 19:55:34
引用回帖:
21楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-25 22:33:12
加酶切位点时红色字体是必须有的,其余的前后很色字体碱基是为了调节GC含量的吗?primer-- blast验证时只输入未加酶切位点的原始引物吗?多谢啦!...

加酶切位点一般你就加在5'端就行啦。。。对的。。Primer-blast验证时只输入未加酶切位点的就行。。。
keepon
22楼2012-11-26 09:30:47
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

找到序列,找公司帮你基因合成吧
23楼2012-11-26 10:00:44
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
23楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-26 10:00:44
找到序列,找公司帮你基因合成吧

那我还有必要在这问大家吗?
24楼2012-11-26 19:04:30
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lvanmorison at 2012-11-22 23:02:02
你是在基因组里面PCR,还是用mRNA来PCR啊?
应该是在基因的CDS序列的前后各设计一个引物,就好了吧。
我也在做这个呢

欲连接真核表达载体,设计引物时有什么药特别注意的呢?
25楼2012-11-26 21:02:54
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
22楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-26 09:30:47
加酶切位点一般你就加在5'端就行啦。。。对的。。Primer-blast验证时只输入未加酶切位点的就行。。。...

有人说连接完T载体后可以只做菌液PCR无需双酶切即可验证,是这样的吗?
26楼2012-11-26 22:15:08
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
26楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-26 22:15:08
有人说连接完T载体后可以只做菌液PCR无需双酶切即可验证,是这样的吗?...

菌液PCR,PCR产物去测序,双酶切验证无意义
27楼2012-11-27 09:04:26
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


yuguiyan: 金币+1 2012-11-28 19:55:57
引用回帖:
25楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-26 21:02:54
欲连接真核表达载体,设计引物时有什么药特别注意的呢?...

ATG前面带个GCCACC
28楼2012-11-27 09:05:08
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
28楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-27 09:05:08
ATG前面带个GCCACC...

ATG前面带个GCCACC

是什么原理啊?
29楼2012-11-27 20:24:27
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


yuguiyan: 金币+1 2012-11-28 19:56:15
引用回帖:
29楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-27 20:24:27
ATG前面带个GCCACC

是什么原理啊?...

潜在的提高表达,详情请搜索kozak序列
30楼2012-11-28 09:07:16
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