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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增基因CDS区域如何设计引物？
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
28楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-27 09:05:08
ATG前面带个GCCACC...

我设计引物时还需要考虑表达载体的酶切位点吗？
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31楼2012-11-28 13:45:21
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
28楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-27 09:05:08
ATG前面带个GCCACC...

如果引物起始位置在ATG之前开始，还要加GCCACC吗？
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32楼2012-11-28 13:47:18
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
30楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-28 09:07:16
潜在的提高表达，详情请搜索kozak序列...

请问Clontch的表达载体pECFP -C1说明书中写道：Furthermore, upstream sequences flanking ECFP have been converted to a Kozak consensus translation initiation site .这是什么意思，我设计引物时需要怎么做？
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33楼2013-02-20 18:36:36
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
22楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-26 09:30:47
加酶切位点一般你就加在5'端就行啦。。。对的。。Primer-blast验证时只输入未加酶切位点的就行。。。...

限制性内切酶酶切位点保护碱基不全时如何确定切割率？例如Kpn I 酶切位点是GGTACC        前面加完保护碱基G,后面加完保护碱基C的“GGGTACCC”  它的2h和20h的切割率都是0，别人给我设计的引物只加了前面保护碱基G,后面没有加C，是    GGGGTACC，那切割率是多少呢？会不会根本切不开啊？

111111111111111.JPG
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34楼2013-02-20 18:38:04
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-02-20 18:38:04
限制性内切酶酶切位点保护碱基不全时如何确定切割率？例如Kpn I 酶切位点是GGTACC        前面加完保护碱基G,后面加完保护碱基C的“GGGTACCC”  它的2h和20h的切割率都是0，别人给我设计的引物只加了前面保护碱基G ...

只在5'端加就行，不用两边都加的。。
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keepon
35楼2013-02-22 09:45:37
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sjlyn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-11-23 21:34:35
在NCBI找到mRNA序列，然后找到它的CDS序列，复制到primer 5.0 中时，是直接复制还是选择“互补”或者“反向互补”之类的其他选项？...

楼主， 你的问题解决没有？我现在也在做这方面的实验，我打算是5`3`reac来获得全长。你是怎么解决的
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36楼2014-05-13 20:27:34
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sjlyn

新虫 (初入文坛)
楼主，你的问题解决没有？它现在又来困惑我了。。
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37楼2014-05-13 20:28:50
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