扩增基因CDS区域如何设计引物？ - 分子生物 - 综合其他 - 第4页小木虫论坛-学术科研互动平台

31楼2012-11-28 13:45:21

yuguiyan

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28楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-27 09:05:08
ATG前面带个GCCACC...

如果引物起始位置在ATG之前开始，还要加GCCACC吗？

32楼2012-11-28 13:47:18

yuguiyan

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30楼: Originally posted by gongeleven at 2012-11-28 09:07:16
潜在的提高表达，详情请搜索kozak序列...

请问Clontch的表达载体pECFP -C1说明书中写道：Furthermore, upstream sequences flanking ECFP have been converted to a Kozak consensus translation initiation site .这是什么意思，我设计引物时需要怎么做？

33楼2013-02-20 18:36:36

yuguiyan

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22楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-11-26 09:30:47
加酶切位点一般你就加在5'端就行啦。。。对的。。Primer-blast验证时只输入未加酶切位点的就行。。。...

限制性内切酶酶切位点保护碱基不全时如何确定切割率？例如Kpn I 酶切位点是GGTACC 前面加完保护碱基G,后面加完保护碱基C的“GGGTACCC” 它的2h和20h的切割率都是0，别人给我设计的引物只加了前面保护碱基G,后面没有加C，是 GGGGTACC，那切割率是多少呢？会不会根本切不开啊？

111111111111111.JPG

34楼2013-02-20 18:38:04

zhlf1989513

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34楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-02-20 18:38:04
限制性内切酶酶切位点保护碱基不全时如何确定切割率？例如Kpn I 酶切位点是GGTACC 前面加完保护碱基G,后面加完保护碱基C的“GGGTACCC” 它的2h和20h的切割率都是0，别人给我设计的引物只加了前面保护碱基G ...

只在5'端加就行，不用两边都加的。。