24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 6048  |  回复: 11

waterworld

木虫 (正式写手)

[求助] 只知道基因CDS区序列,如何扩增该基因的启动子

如题,我想克隆山羊一个基因的启动子,CDS区已经由本实验室另外的师妹克隆出来,本来想克隆5‘RACE之后找到转录起始位点,再克隆启动子的,但是最近发现5'RACE试剂盒用完啦,那个试剂盒比较贵,再买一个的可能性不是很大。所以目前在这种情况下如何克隆该基因的启动子。
还有,山羊和牛的相似性很高,可以参考牛的基因组序列,查到NCBI中有牛的mRNA序列,但是只有部分5’RACE序列,不到100bp的样子。。。因为目前山羊的基因组还没有公布,我们克隆山羊的启动子一般都是根据牛的基因组序列设计,不知道在有这些信息的情况下怎么设计引物克隆????求各位大神指教!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 虫友问答-分子生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Never grow old
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

niil

金虫 (正式写手)

克隆启动子的序列,用5‘ RACE是扩不出来的。
市面上有些genome walking的盒子,可以买着用用。如,宝生物的Genome Walking Kit,一千多块,10次,效果还可以的。
原理很简单,很容易上手,只是在根据CDS设计引物的时候避开外显子和内含子的边界区就可以了。
Stop fighting,let it flow.
10楼2013-06-26 15:40:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
waterworld: 金币+3 2013-06-17 09:58:49
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-17 13:57:50
第一、可以在比对后在保守区设计引物来扩增
第二、步移
希望可以帮到你,试验顺利~~
总有一天我要修改用户名。
2楼2013-06-16 22:36:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongyz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
waterworld: 金币+3 2013-06-17 09:58:41
myprayer: Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-17 13:58:09
这篇文献应该可以解决你的问题: 长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列
3楼2013-06-17 00:16:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
waterworld: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-06-17 09:58:30
myprayer: Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-17 13:58:15
5’-RACE,基因组文库筛选出完整基因,反向PCR,染色体步移等。具体文献和Procotols,查分子克隆。

Molecular cloning--Laboratory manuals(2001)3rd edition(3 Volumes) Free
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5998393
4楼2013-06-17 01:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterworld

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 137167741 at 2013-06-16 22:36:52
第一、可以在比对后在保守区设计引物来扩增
第二、步移
希望可以帮到你,试验顺利~~

谢谢
Never grow old
5楼2013-06-17 09:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterworld

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hongyz at 2013-06-17 00:16:26
这篇文献应该可以解决你的问题: 长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列

谢谢,已经下载 了文献,好好研究一下。
Never grow old
6楼2013-06-17 09:58:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andywang6137

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by waterworld at 2013-06-17 09:58:03
谢谢,已经下载 了文献,好好研究一下。...

MM弄明白了吗?明白了,出来说说
7楼2013-06-18 13:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterworld

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by andywang6137 at 2013-06-18 13:42:54
MM弄明白了吗?明白了,出来说说...

没有太明白,看来看去,越发糊涂了。
Never grow old
8楼2013-06-18 14:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
waterworld: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-06-18 16:34:26
如果已经拿到了CDS区的话,根据序列进行同源比对,初步确定内含子的位子,再根据序列设计特异引物,采用热不对称PCR扩增,这个方法扩增未知序列效率比较高,或者采用染色体步移法也可以!
9楼2013-06-18 15:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 waterworld 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +8 @taotao 2026-03-30 8/400 2026-04-05 11:15 by 风雨无晴
[考研] 化学357分,考研调剂 +10 .Starry. 2026-04-04 11/550 2026-04-05 10:57 by cql1109
[考研] 359求调剂22408 +3 123456789qw 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:09 by zhq0425
[考研] 323分(计算机视觉和大模型项目)能直接上手 +3 chaoxiicy 2026-04-01 3/150 2026-04-05 00:50 by chongya
[考研] 315求调剂 +13 小羊小羊_ 2026-04-02 14/700 2026-04-04 20:30 by 蓝云思雨
[考研] 385分 生物学(071000)求调剂 +9 qf626 2026-04-01 9/450 2026-04-04 18:10 by macy2011
[考研] 求调剂:085600材料与化工,考材科基,总分319 +21 678lucky 2026-03-31 26/1300 2026-04-04 16:22 by dongzh2009
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 266求调剂 +18 阳阳哇塞 2026-04-01 18/900 2026-04-03 18:38 by zllcz
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分,求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 22:25 by zhouyuwinner
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
信息提示
请填处理意见