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waterworld

木虫 (正式写手)

[求助] 只知道基因CDS区序列,如何扩增该基因的启动子

如题,我想克隆山羊一个基因的启动子,CDS区已经由本实验室另外的师妹克隆出来,本来想克隆5‘RACE之后找到转录起始位点,再克隆启动子的,但是最近发现5'RACE试剂盒用完啦,那个试剂盒比较贵,再买一个的可能性不是很大。所以目前在这种情况下如何克隆该基因的启动子。
还有,山羊和牛的相似性很高,可以参考牛的基因组序列,查到NCBI中有牛的mRNA序列,但是只有部分5’RACE序列,不到100bp的样子。。。因为目前山羊的基因组还没有公布,我们克隆山羊的启动子一般都是根据牛的基因组序列设计,不知道在有这些信息的情况下怎么设计引物克隆????求各位大神指教!!!
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waterworld

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 137167741 at 2013-06-16 22:36:52
第一、可以在比对后在保守区设计引物来扩增
第二、步移
希望可以帮到你,试验顺利~~

谢谢
Never grow old
5楼2013-06-17 09:57:21
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waterworld

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hongyz at 2013-06-17 00:16:26
这篇文献应该可以解决你的问题: 长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列

谢谢,已经下载 了文献,好好研究一下。
Never grow old
6楼2013-06-17 09:58:03
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waterworld

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by andywang6137 at 2013-06-18 13:42:54
MM弄明白了吗?明白了,出来说说...

没有太明白,看来看去,越发糊涂了。
Never grow old
8楼2013-06-18 14:40:03
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