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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 水稻用自身启动子转基因互补，gus染色问题
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changeng

新虫 (小有名气)

[求助] 水稻用自身启动子转基因互补，gus染色问题

我转基因互补验证，质粒是pcambia1301   ， gus染色染不出来，但是潮霉素引物能扩出来条带，这是怎么回事，正常吗，高手赐教。谢谢
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1楼2011-06-07 14:57:12
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zhouying_613

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

changeng(金币+3): 2011-06-08 15:13:32
太正常了，GUS染色的假阴性多，潮霉素PCR的假阳性多。
你这个情况我们经常出现。
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2楼2011-06-08 12:00:04
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changeng

新虫 (小有名气)
那你们实验室怎么检测转基因苗？
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3楼2011-06-08 15:18:22
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

changeng(金币+1): 2011-06-13 18:06:28
多对引物PCR,针对不同的片段区域;

Southern是最鉴定的方法，同时可以看下拷贝数！
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4楼2011-06-09 00:31:49
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zhouying_613

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

changeng(金币+1): 2011-06-13 18:06:22
主要看你是想要转基因阳性植株，还是转基因阴性
如果你要阳性就取GUS阳性，要阴性就PCR阴性的。
做southern也很可靠。顺便还能看一下拷贝数。但是我们实验室做southern是要用同位素的，看你是不是愿意做。
另外，你既然是要做转基因植株的验证，那做realtime检测该基因的表达量好了。反正转基因阳性而表达没有改变的植株对你也是没有用的。
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5楼2011-06-10 10:27:34
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GG15721

新虫 (初入文坛)
求GUS染色的具体配方，谢谢！
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6楼2017-03-05 10:23:58
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