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changeng

新虫 (小有名气)

[求助] 水稻用自身启动子转基因互补,gus染色问题

我转基因互补验证,质粒是pcambia1301   , gus染色染不出来,但是潮霉素引物能扩出来条带,这是怎么回事,正常吗,高手赐教。谢谢
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changeng

新虫 (小有名气)

那你们实验室怎么检测转基因苗?
3楼2011-06-08 15:18:22
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zhouying_613

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

changeng(金币+3): 2011-06-08 15:13:32
太正常了,GUS染色的假阴性多,潮霉素PCR的假阳性多。
你这个情况我们经常出现。
2楼2011-06-08 12:00:04
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

changeng(金币+1): 2011-06-13 18:06:28
多对引物PCR,针对不同的片段区域;

Southern是最鉴定的方法,同时可以看下拷贝数!
4楼2011-06-09 00:31:49
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zhouying_613

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

changeng(金币+1): 2011-06-13 18:06:22
主要看你是想要转基因阳性植株,还是转基因阴性
如果你要阳性就取GUS阳性,要阴性就PCR阴性的。
做southern也很可靠。顺便还能看一下拷贝数。但是我们实验室做southern是要用同位素的,看你是不是愿意做。
另外,你既然是要做转基因植株的验证,那做realtime检测该基因的表达量好了。反正转基因阳性而表达没有改变的植株对你也是没有用的。
5楼2011-06-10 10:27:34
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