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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 只知道基因CDS区序列，如何扩增该基因的启动子
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waterworld

木虫 (正式写手)

[求助] 只知道基因CDS区序列，如何扩增该基因的启动子

如题，我想克隆山羊一个基因的启动子，CDS区已经由本实验室另外的师妹克隆出来，本来想克隆5‘RACE之后找到转录起始位点，再克隆启动子的，但是最近发现5'RACE试剂盒用完啦，那个试剂盒比较贵，再买一个的可能性不是很大。所以目前在这种情况下如何克隆该基因的启动子。
还有，山羊和牛的相似性很高，可以参考牛的基因组序列，查到NCBI中有牛的mRNA序列，但是只有部分5’RACE序列，不到100bp的样子。。。因为目前山羊的基因组还没有公布，我们克隆山羊的启动子一般都是根据牛的基因组序列设计，不知道在有这些信息的情况下怎么设计引物克隆？？？？求各位大神指教！！！
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Never grow old
1楼 2013-06-16 21:34:20
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
waterworld: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-06-18 16:34:26
如果已经拿到了CDS区的话，根据序列进行同源比对，初步确定内含子的位子，再根据序列设计特异引物，采用热不对称PCR扩增，这个方法扩增未知序列效率比较高，或者采用染色体步移法也可以！
赞一下 回复此楼
9楼2013-06-18 15:00:15
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