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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 克隆表达基因大小不对了 怎么回事？
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LAMME5

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆表达基因大小不对了 怎么回事？ 已有2人参与

最近做克隆表达，先克隆出枯草芽孢杆菌一段基因，连pMA5质粒，先转大肠杆菌JM109，酶切验证和PCR验证大小正确，保藏菌种。但是过了一段时间后，重新活化菌种，提质粒，发现酶切和PCR验证大小都不对，基因变小了  这是怎么回事呢  最近很郁闷的啊  担心是染菌了  划线挑单菌落还是不对   到底是什么原因的呢  求大神指导一下啊   谢谢
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1楼 2014-04-08 08:47:24
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cs2951819

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
LAMME5(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-08 12:17:51
LAMME5: 金币+4 2014-04-10 16:00:27
第一，同学，你是怎么保藏菌种的？甘油管？第二，保藏了多久？如果保藏时间过久，是有可能丢失的，第三，不太可能质粒上片段变小，一般都是质粒直接丢失？考虑是不是染菌

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-04-08 09:05:33
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LAMME5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cs2951819 at 2014-04-08 09:05:33
第一，同学，你是怎么保藏菌种的？甘油管？第二，保藏了多久？如果保藏时间过久，是有可能丢失的，第三，不太可能质粒上片段变小，一般都是质粒直接丢失？考虑是不是染菌
...

甘油冻管保藏的啊  保藏半个月左右的啊  我划线挑出单菌落的啊  还是不对  应该不是染菌造成
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3楼2014-04-08 11:25:44
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LAMME5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by LAMME5 at 2014-04-08 11:25:44
甘油冻管保藏的啊  保藏半个月左右的啊  我划线挑出单菌落的啊  还是不对  应该不是染菌造成...

有没有人遇到过类似的情况的啊  出来交流交流啊
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4楼2014-04-08 18:36:20
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
LAMME5: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-04-10 16:00:18
引用回帖:
4楼: Originally posted by LAMME5 at 2014-04-08 18:36:20
有没有人遇到过类似的情况的啊  出来交流交流啊...

何必在这浪费时间呢，重新做得了，一般情况下，除了甘油菌保存，还可以留点质粒样品，不至于遇到你这样的麻烦事啊

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-04-08 20:14:41
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tccwinnie

新虫 (初入文坛)
请问楼主这个问题解决了没有，我现在也遇到了这个问题，冻存的重新提了质粒，大小正确，可是做转化后，有水解圈的质粒大小却变小了，双酶切也切不动，不知道为什么，求解
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6楼2014-04-14 10:38:36
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