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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 克隆未知基因。有这方面经验的战友帮助下。

我要克隆一个鱼的未知基因。我有以下疑问：1，我克隆鱼的一个未知基因。我该找多少生物的该基因来比对找保守区。因为鱼类的比较少，就两种鱼NCBI里面有Sequence，还是预测的，我不得不找人类，小鼠等哺乳动物的该基因来补上。同源性还是有80%的。可以吧？一共能凑齐七八种，不知道够不够？2，简并引物设计5对够不够？3，PCR条件是按常规的还是自己优化一下比较好哦？4.从开始到拿到基因全长抓紧时间的话要多久？谢谢解答，谢谢哦。
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1楼 2012-08-06 16:40:40
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流！ 2012-08-06 20:17:45
fengyunqb: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-08-07 18:58:31
fengyunqb: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-08-08 09:13:34
本帖内容被屏蔽
2楼2012-08-06 17:24:41
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流！ 2012-08-06 20:17:54
fengyunqb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-07 18:58:45
单纯克隆个基因，用7，8个鱼的序列比对用保守区设计引物是可以的。
克隆未知基因，楼主是否知道这个基因控制什么性状啊，以及为什么要克隆这个基因呢？是想克隆出来验证其功能嘛？其次，还需要该基因是否是多基因家族，否则克隆出来也无法确定是否就是你需要的基因哈。
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3楼2012-08-06 18:31:30
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这方面的知识我也会刚刚涉猎，学习一下
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
4楼2012-08-06 20:49:09
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小小微生物

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1, ★有帮助 2012-08-07 18:58:59
5对差不多了  我们实验室就是用5对，优化一下不错，时间嘛 要看运气喽
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5楼2012-08-07 07:56:05
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hualelele33

新虫 (初入文坛)
用电子克隆，拼接的方法也可以的
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6楼2012-08-08 10:59:59
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
7楼2012-08-08 20:03:59
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光树林

木虫 (著名写手)
表示2楼很强大，佩服！
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一路向北
8楼2012-08-08 20:31:25
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
前面的网友提过了，同源性是定性描述，不是定量描述的，但是很多杂志都在这个概念上出错。先找亲缘物种的对应蛋白质序列来比对，再设计简并引物。常用的设计简并引物的程序如CODEHOP程序，我用过，很好用。通过简并PCR得到部分片段后，再通过适当的PCR Walking克隆两端的旁邻序列，获得全长序列，比如TAIL PCR, SiteFinding PCR等。
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9楼2012-08-09 19:28:41
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