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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 克隆未知基因。有这方面经验的战友帮助下。

我要克隆一个鱼的未知基因。我有以下疑问:1,我克隆鱼的一个未知基因。我该找多少生物的该基因来比对找保守区。因为鱼类的比较少,就两种鱼NCBI里面有Sequence,还是预测的,我不得不找人类,小鼠等哺乳动物的该基因来补上。同源性还是有80%的。可以吧?一共能凑齐七八种,不知道够不够?2,简并引物设计5对够不够?3,PCR条件是按常规的还是自己优化一下比较好哦?4.从开始到拿到基因全长抓紧时间的话要多久?谢谢解答,谢谢哦。
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)

前面的网友提过了,同源性是定性描述,不是定量描述的,但是很多杂志都在这个概念上出错。先找亲缘物种的对应蛋白质序列来比对,再设计简并引物。常用的设计简并引物的程序如CODEHOP程序,我用过,很好用。通过简并PCR得到部分片段后,再通过适当的PCR Walking克隆两端的旁邻序列,获得全长序列,比如TAIL PCR, SiteFinding PCR等。
9楼2012-08-09 19:28:41
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流! 2012-08-06 20:17:45
fengyunqb: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-08-07 18:58:31
fengyunqb: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-08-08 09:13:34
本帖内容被屏蔽

2楼2012-08-06 17:24:41
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流! 2012-08-06 20:17:54
fengyunqb: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-07 18:58:45
单纯克隆个基因,用7,8个鱼的序列比对用保守区设计引物是可以的。
克隆未知基因,楼主是否知道这个基因控制什么性状啊,以及为什么要克隆这个基因呢?是想克隆出来验证其功能嘛?其次,还需要该基因是否是多基因家族,否则克隆出来也无法确定是否就是你需要的基因哈。
3楼2012-08-06 18:31:30
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这方面的知识我也会刚刚涉猎,学习一下
事实证明,除了你自己,不要指望任何一个人
4楼2012-08-06 20:49:09
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