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godloveplum

金虫 (小有名气)

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[求助] 基因全长克隆已有4人参与

我想克隆基因的全长，但是我不知道基因全长的准确序列，只是有通过同源性比较基因组得出的假定的序列，用假定序列设计引物后，没有P出条带来，希望有经验的前辈能给予指点，不胜感激！

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Nothingisimpossibleforawillingheart!

1楼 2014-07-13 14:38:21

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青青草allan

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by piaoxue1216 at 2014-07-15 16:43:05
我是把基因的片段都扩出来了，包括中间片段，race5’和race3’，也设了引物，用的模板是测序返回来的质粒，但是就是拼接不上去，想问一下引物有什么要求吗，是片段两两加进去还是三段片段一起加进去...

5’端和3’端全长都得到了吗？你说拼接不上去，意思是不是得到的各个片段间都没有重叠序列？