应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 普通PCR遇到的问题，求助大神们
131/2返回列表12下一页
查看: 2078  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 普通PCR遇到的问题，求助大神们 已有6人参与

扩全长基因，基因大小825bp。八个温度梯度（52.5-54）,上下游引物Tm值分别为47.1、51.6、选用这个温度是因为之前梯度PCR未出来条带，在53度有杂带。图片如下，我应该怎么继续优化条件，虫虫们指导一下。谢谢啦

普通PCR遇到的问题，求助大神们
20140630-2_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
踏实
1楼 2014-07-02 13:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-02 15:37:30
内容已删除
赞一下(3人) 回复此楼
rainwater
2楼2014-07-02 13:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:51:01
应该是引物设计的不好，引物的Tm值太低。关于53℃有杂带的问题，有几个方面减少非特异性扩增，一方面采用热启动酶，另外可以添加一些PCR添加剂，如甜菜碱，DMSO等；还可以采用降落PCR的方法减少非特异性扩增。最好将 ...

扩全长，避免发夹结构，这个引物差不多只能这样啦。要不就出现发夹结构了
赞一下(1人) 回复此楼
踏实
3楼2014-07-02 13:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只能说引物不行  温度太低  小900的片段引物设计好不会很难的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2014-07-04 08:12:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

流氓一个

金虫 (正式写手)
Tm值相差好几度 没问题么
赞一下 回复此楼
我有我人生
4楼2014-07-02 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aini_222925

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:22:15
这非特异也太严重了，换个酶试试看。
赞一下 回复此楼
我是疯子我怕谁
5楼2014-07-02 17:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:22:22
升高温度试试吧，能降低非特异性带
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-02 18:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:51:01
应该是引物设计的不好，引物的Tm值太低。关于53℃有杂带的问题，有几个方面减少非特异性扩增，一方面采用热启动酶，另外可以添加一些PCR添加剂，如甜菜碱，DMSO等；还可以采用降落PCR的方法减少非特异性扩增。最好将 ...

好的，谢谢，我这几天就着手再试试
赞一下 回复此楼
踏实
7楼2014-07-03 16:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

335341312

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-02 13:55:22
扩全长，避免发夹结构，这个引物差不多只能这样啦。要不就出现发夹结构了...

引物里面即使有发夹结构也能扩出来，只要3‘端没有就可以
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-03 16:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 22:57:40
你最下面的引物二聚体也太亮了，引物少加点，看引物问题不是很大，关键是用什么做的模板，质粒的话很容易就扩出来了，基因组或者cDNA的话关键是要保证模板质量，10倍稀释后退火温度用55°扩扩看
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-04 14:56:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hajierlove 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +13 羊腰板 2026-08-21 13/650 2026-08-23 09:25 by lfy8008
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭