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hajierlove

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[求助] 普通PCR遇到的问题，求助大神们已有6人参与

扩全长基因，基因大小825bp。八个温度梯度（52.5-54）,上下游引物Tm值分别为47.1、51.6、选用这个温度是因为之前梯度PCR未出来条带，在53度有杂带。图片如下，我应该怎么继续优化条件，虫虫们指导一下。谢谢啦

20140630-2_副本.jpg

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踏实

1楼 2014-07-02 13:16:18

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zhangyunjing

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【答案】应助回帖

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rainwater

2楼2014-07-02 13:51:01

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hajierlove

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:51:01
应该是引物设计的不好，引物的Tm值太低。关于53℃有杂带的问题，有几个方面减少非特异性扩增，一方面采用热启动酶，另外可以添加一些PCR添加剂，如甜菜碱，DMSO等；还可以采用降落PCR的方法减少非特异性扩增。最好将 ...

扩全长，避免发夹结构，这个引物差不多只能这样啦。要不就出现发夹结构了

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踏实

3楼2014-07-02 13:55:22

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