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PCR引物一大堆CG，跪求大神们支招 已有1人参与
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| 我用PET-28a载体，设计的引物序列是TTAGGATCC---ATGTGCGAGCCCGGGGACATTAC，这是mRNA,在各种数据里都找不到ATG前面的序列，用这个作为上游引物能不能P出来呀？还有其他的什么办法能把这发夹解开吗？跪求…………急…………谢谢各位大侠！ |
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tu475575025
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2楼2014-03-20 15:31:26
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-03-22 22:40:39
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-03-22 22:40:39
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给你出个主意： 1、设计一对有突变的引物，5端带上你要的GC，发夹结构处适当突变一两个碱基，3端再多加几个互补碱基，这个就避免了发夹结构，应该是可以p出来，但是p出来的基因读码可能应为一两个碱基的突变而出错（如果你考虑一下密码子，看有没可能设计无义突变来避免发夹）； 2、然后就是用你现在的引物以上一轮突变的产物做模板来扩增，特异性肯定很高（除了你突变的一两个碱基，都能完全互补） ps：用简单的模板（质粒、纯化的pcr产物）可以减少错配，不用复杂的。 同是被实验虐，这是我的经验，祝成功！ |
4楼2014-03-22 19:51:16
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