24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1877  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 普通PCR遇到的问题,求助大神们 已有6人参与

扩全长基因,基因大小825bp。八个温度梯度(52.5-54),上下游引物Tm值分别为47.1、51.6、选用这个温度是因为之前梯度PCR未出来条带,在53度有杂带。图片如下,我应该怎么继续优化条件,虫虫们指导一下。谢谢啦

普通PCR遇到的问题,求助大神们
20140630-2_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

踏实
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
只能说引物不行  温度太低  小900的片段引物设计好不会很难的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2014-07-04 08:12:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:51:01
应该是引物设计的不好,引物的Tm值太低。关于53℃有杂带的问题,有几个方面减少非特异性扩增,一方面采用热启动酶,另外可以添加一些PCR添加剂,如甜菜碱,DMSO等;还可以采用降落PCR的方法减少非特异性扩增。最好将 ...

扩全长,避免发夹结构,这个引物差不多只能这样啦。要不就出现发夹结构了
踏实
3楼2014-07-02 13:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流氓一个

金虫 (正式写手)

Tm值相差好几度 没问题么
我有我人生
4楼2014-07-02 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aini_222925

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:22:15
这非特异也太严重了,换个酶试试看。
我是疯子我怕谁
5楼2014-07-02 17:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +5 星野? 2026-03-26 5/250 2026-03-28 08:17 by Iveryant
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:46 by barnett0632
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +10 哈哈157349 2026-03-21 10/500 2026-03-27 13:06 by zzll406
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 材料学硕,求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-27 07:58 by chemisry
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 26考研-291分-厦门大学(085601)-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 315分,诚求调剂,材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
信息提示
请填处理意见