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yuliang13

木虫 (小有名气)

[求助] pcr的产物有吗?(菜鸟求教大神) 已有2人参与

如下图,1与4是同一产物(模板,引物,PCR温度时间等条件完全一样),2与3是同一产物(模板,引物,PCR温度时间等条件完全一样),M是Marker,6个条带,分别是500bp 1000bp 1500bp ……(后面三条忘记了)。想请教各位大神们,2与3 究竟有没有p出来啊?我纯化2与3后,浓度都是70+ng/ul,对吗?出了什么问题啊?!
注:2与3片段约1200bp。

pcr的产物有吗?(菜鸟求教大神)
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-26 09:31:41
2,3的退火温度是多少?非特异扩增很严重哦,约1200bp的目的片段出来了,就是非特异扩增。你没有做引物的退火温度梯度PCR吗?
2楼2014-05-26 00:22:47
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yuliang13

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-05-26 00:22:47
2,3的退火温度是多少?非特异扩增很严重哦,约1200bp的目的片段出来了,就是非特异扩增。你没有做引物的退火温度梯度PCR吗?

没有,师姐给我的,告诉我退火温度57度。2和3的产物是不是不能用啊?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-05-26 14:00:35
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuliang13 at 2014-05-26 14:00:35
没有,师姐给我的,告诉我退火温度57度。2和3的产物是不是不能用啊?
...

嗯嗯,再优化一下退火温度。或者改用GC buffer。
4楼2014-05-26 17:46:34
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yuliang13

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-05-26 17:46:34
嗯嗯,再优化一下退火温度。或者改用GC buffer。...

哦,我再试试!
5楼2014-05-26 21:52:39
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

6楼2014-05-26 22:42:19
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