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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr的产物有吗？（菜鸟求教大神）
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yuliang13

木虫 (小有名气)

[求助] pcr的产物有吗？（菜鸟求教大神） 已有2人参与

如下图，1与4是同一产物（模板，引物，PCR温度时间等条件完全一样），2与3是同一产物（模板，引物，PCR温度时间等条件完全一样），M是Marker，6个条带，分别是500bp 1000bp 1500bp ……（后面三条忘记了）。想请教各位大神们，2与3 究竟有没有p出来啊？我纯化2与3后，浓度都是70+ng/ul，对吗？出了什么问题啊？！
注：2与3片段约1200bp。

pcr的产物有吗？（菜鸟求教大神）
955.jpg
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1楼 2014-05-25 23:54:12
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yuliang13

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-05-26 00:22:47
2，3的退火温度是多少？非特异扩增很严重哦，约1200bp的目的片段出来了，就是非特异扩增。你没有做引物的退火温度梯度PCR吗？

没有，师姐给我的，告诉我退火温度57度。2和3的产物是不是不能用啊？

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-05-26 14:00:35
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-26 09:31:41
2，3的退火温度是多少？非特异扩增很严重哦，约1200bp的目的片段出来了，就是非特异扩增。你没有做引物的退火温度梯度PCR吗？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-05-26 00:22:47
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuliang13 at 2014-05-26 14:00:35
没有，师姐给我的，告诉我退火温度57度。2和3的产物是不是不能用啊？
...

嗯嗯，再优化一下退火温度。或者改用GC buffer。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-26 17:46:34
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yuliang13

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-05-26 17:46:34
嗯嗯，再优化一下退火温度。或者改用GC buffer。...

哦，我再试试！
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5楼2014-05-26 21:52:39
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