应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 普通PCR遇到的问题，求助大神们
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1870  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 普通PCR遇到的问题，求助大神们 已有6人参与

扩全长基因，基因大小825bp。八个温度梯度（52.5-54）,上下游引物Tm值分别为47.1、51.6、选用这个温度是因为之前梯度PCR未出来条带，在53度有杂带。图片如下，我应该怎么继续优化条件，虫虫们指导一下。谢谢啦

普通PCR遇到的问题，求助大神们
20140630-2_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
踏实
1楼 2014-07-02 13:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-02 15:37:30
内容已删除
赞一下(3人) 回复此楼
rainwater
2楼2014-07-02 13:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:51:01
应该是引物设计的不好，引物的Tm值太低。关于53℃有杂带的问题，有几个方面减少非特异性扩增，一方面采用热启动酶，另外可以添加一些PCR添加剂，如甜菜碱，DMSO等；还可以采用降落PCR的方法减少非特异性扩增。最好将 ...

扩全长，避免发夹结构，这个引物差不多只能这样啦。要不就出现发夹结构了
赞一下(1人) 回复此楼
踏实
3楼2014-07-02 13:55:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只能说引物不行  温度太低  小900的片段引物设计好不会很难的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2014-07-04 08:12:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

流氓一个

金虫 (正式写手)
Tm值相差好几度 没问题么
赞一下 回复此楼
我有我人生
4楼2014-07-02 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aini_222925

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:22:15
这非特异也太严重了，换个酶试试看。
赞一下 回复此楼
我是疯子我怕谁
5楼2014-07-02 17:21:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-03 12:22:22
升高温度试试吧，能降低非特异性带
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-02 18:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:51:01
应该是引物设计的不好，引物的Tm值太低。关于53℃有杂带的问题，有几个方面减少非特异性扩增，一方面采用热启动酶，另外可以添加一些PCR添加剂，如甜菜碱，DMSO等；还可以采用降落PCR的方法减少非特异性扩增。最好将 ...

好的，谢谢，我这几天就着手再试试
赞一下 回复此楼
踏实
7楼2014-07-03 16:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

335341312

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-02 13:55:22
扩全长，避免发夹结构，这个引物差不多只能这样啦。要不就出现发夹结构了...

引物里面即使有发夹结构也能扩出来，只要3‘端没有就可以
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-03 16:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 22:57:40
你最下面的引物二聚体也太亮了，引物少加点，看引物问题不是很大，关键是用什么做的模板，质粒的话很容易就扩出来了，基因组或者cDNA的话关键是要保证模板质量，10倍稀释后退火温度用55°扩扩看
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-04 14:56:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hajierlove 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 322求调剂 +4 旧吢 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:38 by 不吃魚的貓
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 071000生物学求调剂，初试成绩343 +6 小小甜面团 2026-03-25 6/300 2026-03-26 23:01 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭