24小时热门版块排行榜    

查看: 4074  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)

[交流] 想检测一个大约4kD 的小肽片段,western blot 一直没有条带怎么办 已有6人参与

最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带,
很是郁闷啊,这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高? 转膜方面, 我用的是100V 冰上转膜一个半小时,是不是转过了?

请虫友们给点建议吧
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 实验技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

花开花落,云卷云舒
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pengchenping at 2014-07-07 21:41:15
貌似15%的分离胶分辨不出4kda的吧,多半跑出去啦。
...

那应该用多大的呢

[ 发自小木虫客户端 ]
花开花落,云卷云舒
8楼2014-07-07 22:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

yipan

铜虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:45:00
上样量加大,转膜1 h足够。分子量太小了,缩短转膜时间。
2楼2014-06-12 13:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for5

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:45:07
分子量小就用浓度大点的胶,电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转,理论上时间有点长,具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
3楼2014-06-12 14:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by for5 at 2014-06-12 14:37:08
分子量小就用浓度大点的胶,电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转,理论上时间有点长,具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧
...

我用过15%的胶,也都试过交联度为3和5的,用100V 电压,结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪,你在做实验的时候有没有出现这种问题啊,还是我们的电泳仪有问题?
花开花落,云卷云舒
4楼2014-06-12 15:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 言之凿凿,8月21号(明天)放榜 +12 医学老男孩 2026-08-20 14/700 2026-08-20 10:53 by ran2233
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见