应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办
51/1返回列表
查看: 3619  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)

[交流] 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办 已有6人参与

最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带，
很是郁闷啊，这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高？ 转膜方面， 我用的是100V 冰上转膜一个半小时，是不是转过了？

请虫友们给点建议吧
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 实验技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
花开花落，云卷云舒
1楼 2014-06-12 12:39:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengchenping

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangxueflower at 2014-06-12 15:59:45
我用过15%的胶，也都试过交联度为3和5的，用100V 电压，结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪，你在做实验的时候有没有出现这种问题啊，还是我们的电泳仪有问题？...

貌似15％的分离胶分辨不出4kda的吧，多半跑出去啦。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-07 20:41:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

yipan

铜虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:00
上样量加大，转膜1 h足够。分子量太小了，缩短转膜时间。
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-12 13:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for5

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:07
分子量小就用浓度大点的胶，电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转，理论上时间有点长，具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
操蛋的XX
3楼2014-06-12 14:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by for5 at 2014-06-12 14:37:08
分子量小就用浓度大点的胶，电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转，理论上时间有点长，具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧
...

我用过15%的胶，也都试过交联度为3和5的，用100V 电压，结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪，你在做实验的时候有没有出现这种问题啊，还是我们的电泳仪有问题？
赞一下(1人) 回复此楼
花开花落，云卷云舒
4楼2014-06-12 15:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +7 梁梁校校 2026-03-19 7/350 2026-03-20 08:47 by 无际的草原
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +8 步川酷紫123 2026-03-13 8/400 2026-03-20 08:47 by xingguangj
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭