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wangxueflower

木虫 (小有名气)

[交流] 想检测一个大约4kD 的小肽片段,western blot 一直没有条带怎么办 已有6人参与

最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带,
很是郁闷啊,这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高? 转膜方面, 我用的是100V 冰上转膜一个半小时,是不是转过了?

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花开花落,云卷云舒
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for5

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:45:07
分子量小就用浓度大点的胶,电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转,理论上时间有点长,具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
3楼2014-06-12 14:37:08
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yipan

铜虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:45:00
上样量加大,转膜1 h足够。分子量太小了,缩短转膜时间。
2楼2014-06-12 13:09:37
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wangxueflower

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by for5 at 2014-06-12 14:37:08
分子量小就用浓度大点的胶,电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转,理论上时间有点长,具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧
...

我用过15%的胶,也都试过交联度为3和5的,用100V 电压,结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪,你在做实验的时候有没有出现这种问题啊,还是我们的电泳仪有问题?
花开花落,云卷云舒
4楼2014-06-12 15:59:45
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FATVICKY

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:45:28
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangxueflower at 2014-06-12 15:59:45
我用过15%的胶,也都试过交联度为3和5的,用100V 电压,结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪,你在做实验的时候有没有出现这种问题啊,还是我们的电泳仪有问题?...

我们用的电泳仪出现那种问题,一般是插头接触不好,需要你重新弄一下,还有就是两块板之间的电泳液少了,也会自动断电报错。。

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5楼2014-06-12 16:32:23
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