应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办
51/1返回列表
查看: 3609  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)

[交流] 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办 已有6人参与

最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带，
很是郁闷啊，这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高？ 转膜方面， 我用的是100V 冰上转膜一个半小时，是不是转过了？

请虫友们给点建议吧
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 实验技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
花开花落，云卷云舒
1楼 2014-06-12 12:39:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

FATVICKY

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:28
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangxueflower at 2014-06-12 15:59:45
我用过15%的胶，也都试过交联度为3和5的，用100V 电压，结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪，你在做实验的时候有没有出现这种问题啊，还是我们的电泳仪有问题？...

我们用的电泳仪出现那种问题，一般是插头接触不好，需要你重新弄一下，还有就是两块板之间的电泳液少了，也会自动断电报错。。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wangxueflower
5楼2014-06-12 16:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

yipan

铜虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:00
上样量加大，转膜1 h足够。分子量太小了，缩短转膜时间。
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-12 13:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for5

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:07
分子量小就用浓度大点的胶，电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转，理论上时间有点长，具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
操蛋的XX
3楼2014-06-12 14:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by for5 at 2014-06-12 14:37:08
分子量小就用浓度大点的胶，电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转，理论上时间有点长，具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧
...

我用过15%的胶，也都试过交联度为3和5的，用100V 电压，结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪，你在做实验的时候有没有出现这种问题啊，还是我们的电泳仪有问题？
赞一下(1人) 回复此楼
花开花落，云卷云舒
4楼2014-06-12 15:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学336分求调剂 +5 zbzihdhd 2026-03-15 6/300 2026-03-18 04:34 by anny19840123
[考研] 299求调剂 +4 △小透明* 2026-03-17 4/200 2026-03-17 20:09 by peike
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 326求调剂 +4 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 7/350 2026-03-16 17:11 by 诺贝尔化学奖觊�
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭