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想检测一个大约4kD 的小肽片段,western blot 一直没有条带怎么办
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wangxueflower
木虫
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MM
专业: 神经精神药物药理
[交流]
想检测一个大约4kD 的小肽片段,western blot 一直没有条带怎么办
已有6人参与
最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带,
很是郁闷啊,这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高? 转膜方面, 我用的是100V 冰上转膜一个半小时,是不是转过了?
请虫友们给点建议吧
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花开花落,云卷云舒
1楼
2014-06-12 12:39:37
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专业: 细胞信号转导
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩!
2014-07-08 10:45:28
引用回帖:
4楼
:
Originally posted by
wangxueflower
at 2014-06-12 15:59:45
我用过15%的胶,也都试过交联度为3和5的,用100V 电压,结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪,你在做实验的时候有没有出现这种问题啊,还是我们的电泳仪有问题?...
我们用的电泳仪出现那种问题,一般是插头接触不好,需要你重新弄一下,还有就是两块板之间的电泳液少了,也会自动断电报错。。
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wangxueflower
5楼
2014-06-12 16:32:23
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