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糖泡泡金虫 (正式写手)
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western blot中古怪的非特异性条带
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最近做western blot总受一些非特异性条带的干扰，虽查了好多资料，一一排查，还是没有解决。想问下我的蛋白经过反应后是溶解在酸性溶液里（pH 4.0-6.0）,直接加入loading buffer煮沸后电泳转膜显色，酸性溶液中的蛋白直接western blot会是非特异性显色的来源吗？大家还有什么好的建议针对我的非特异性。 Ps，发现从背面看我的特异性条带特别明显，非特异性条带不怎么清楚。但正面看膜的话特异性条带模糊，非特异性条带特别浓，这又是什么原因？ Help!  [ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 15:59 ] |
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糖泡泡: 金币+3 2013-07-05 14:07:40
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正面背面的问题，难道你的转膜有穿孔现象？可以换张另一批次的PVDF膜再做次看看， 杂带问题一般说来，先稀释样品，做个梯度，如果还有杂带，稀释一抗，做梯度，试试如何，再不行，投诉抗体公司，不是你的错 |
2楼2013-06-28 19:39:56
cicelyzh
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【答案】应助回帖
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我没有遇到过这种情况。因为western是半定量的，应该是蛋白量越多条带越深。不知道你做western的目的是什么，既然目标蛋白和非特异条带在胶上位置不同，应该可以区分，这种结果也算是可以接受的吧。我几乎不用QQ的。你可以发email给我：cicelyzhang@hotmail.com |
10楼2013-07-06 13:42:57