应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » NI 柱纯化重组蛋白无法洗脱是什么原因？
101/1返回列表
查看: 2554  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhangjie_924

新虫 (小有名气)

[求助] NI 柱纯化重组蛋白无法洗脱是什么原因？ 已有4人参与

最近一直在做重组蛋白的纯化，8M盐酸胍（PBS稀释）变性，室温平衡40min,与NI柱结合1h ,灌柱，复性，梯度洗脱
，但跑不出想要的峰值，接收不到纯化的蛋白，后续又对盐酸胍变性液和NI柱WB检测，发现我的目的蛋白主要都在NI柱子上，而且出现重组聚集状态，在这里求助高手，如何解决蛋白结合ni柱，无法洗脱的问题，再有，蛋白聚集的原因是什么，如何解决，蛋白聚集是否是无洗脱的原因？谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-10 09:25:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)
具体洗脱步骤？？？
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-06-10 09:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-06-10 09:36:53
具体洗脱步骤？？？

到处都是洗脱方法，我只关心我想知道的，蛋白聚集是什么原因，无法洗脱的原因有哪些？
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-10 09:40:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
复性失败导致蛋白聚集，
聚集的蛋白不溶于PBS溶液，
只能用8M盐酸胍洗脱下来，
不然你的Ni柱也没法再用了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2014-06-10 15:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么用PBS稀释  蛋白沉在柱子上啦  要全程变性条件
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-06-10 16:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降低pH值试试看，到6.8，不行，到6.5， 同时加入咪唑。
赞一下(1人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
6楼2014-06-10 18:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2014-06-10 16:46:00
为什么用PBS稀释  蛋白沉在柱子上啦  要全程变性条件

全程变性条件是什么意思？谢谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2014-06-11 12:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-10 18:04:46
降低pH值试试看，到6.8，不行，到6.5， 同时加入咪唑。

我的洗脱液是PH=5.8 0.5M的咪唑，您说的PH和咪唑是指哪部分？谢谢谢
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-11 12:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-10 15:51:03
复性失败导致蛋白聚集，
聚集的蛋白不溶于PBS溶液，
只能用8M盐酸胍洗脱下来，
不然你的Ni柱也没法再用了。

您说的8M的盐酸胍是用纯水稀释的吗？
复性失败的原因可能有哪些呢？非常感谢
赞一下 回复此楼
9楼2014-06-11 12:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YangKang7057

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangjie_924: 金币+5 2014-12-08 11:14:17
变复性的过程中，PH值最好是8.5左右有利于复性，复性过程中蛋白大量聚集可能是变复性失败，不知道你的蛋白中是否含有二硫键，另外，稀释复性最好是8M 6M 4M 2M 1M 最后透析比较好，如果二硫键含量较多，可以选择其他变复性方法
赞一下 回复此楼
10楼2014-06-12 14:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhangjie_924 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:14 by Z9YWQ5EAO3qp
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +4 tianxiaoxian 2026-09-28 7/350 2026-09-30 08:34 by 88817753
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭