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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蛋白纯化中Ni-NTA变紫色！
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amazingjunny

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化中Ni-NTA变紫色！已有2人参与

纯化前用50mM Tris pH 8.5, 300mM NaCl, 4mM β-ME，30mM imidazole，Ni-NTA马上变成紫色，用相同成分但pH为7.4的buffer冲洗后紫色消失，所以应该不是还原剂的问题，填料的参数显示可在pH范围为3－12,很好奇是什么原因，求高人指点！多谢！
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1楼2013-12-09 16:11:36
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1，蛋白是否带颜色；2,可能是2-ME浓度比较高
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2楼2013-12-09 17:38:20
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amazingjunny

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alarace at 2013-12-09 17:38:20
1，蛋白是否带颜色；2,可能是2-ME浓度比较高

谢谢，蛋白没有颜色，纯化前平衡，并没有上样……变紫色后我用同样组分（β-ME）浓度相同，只是pH变成了7.4,柱子就恢复了，难道是在碱性条件下β-ME还原性更强么？
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3楼2013-12-09 19:47:52
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个是有点奇怪，楼主该检查一下试剂是否有问题，或者填料是不是正品
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
4楼2013-12-11 20:49:56
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amazingjunny

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-12-11 20:49:56
这个是有点奇怪，楼主该检查一下试剂是否有问题，或者填料是不是正品

嗯，谢谢
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5楼2013-12-12 09:47:37
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花雨渡飞仙

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你用的谁家的填料啊？
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6楼2013-12-18 13:59:12
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amazingjunny

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 花雨渡飞仙 at 2013-12-18 13:59:12
你用的谁家的填料啊？

GE Ni sepherose fast flow
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7楼2013-12-20 10:45:09
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