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da_da

金虫 (小有名气)

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[求助] Ni-NTA纯化蛋白

用Ni柱纯化带His-tag的蛋白，看说明书上说如果是纯化相同的蛋白用0.5M的NaOH洗30min就行。我想知道如果是纯化不同的蛋白呢，那我要把树脂都扔了换新的吗？还是需要怎么处理一下才能纯化另一种新的蛋白呢请知道的大神指导一下吧

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1楼2012-06-28 20:56:13

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dshlove

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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1949stone: MolEPI+1, 支持 2012-06-29 13:05:50
da_da: 金币+3 2012-06-29 18:52:50
da_da: 金币+4 2012-08-30 10:13:29

我觉得，首先你要先弄清楚你的目的，你是要清洗柱子还是要再生柱子。
我给你点建议啊：
1.平常清洗（每次使用后，就算下次用在不同蛋白纯化上也适用。）
先用500mM咪唑冲洗3-5个柱体积，然后立即用纯水平衡5个柱体积。
2.每月清洗（一个月或者使用15次左右，柱子载量有所下降时，记住是载量下降了，所以，你说的方法不是常规的清晰方法。）
0.2M NaOH 冲洗2个柱体积，室温放置一夜或37℃放置2h。再用纯水平衡至少5个柱体积。
3.挂镍再生（柱子堵塞，压力升高，载量显著下降时），这个就比较麻烦了，需要的话再给你。