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Ni-NTA纯化蛋白
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| 用Ni柱纯化带His-tag的蛋白，看说明书上说如果是纯化相同的蛋白用0.5M的NaOH洗30min就行。我想知道如果是纯化不同的蛋白呢，那我要把树脂都扔了换新的吗？还是需要怎么处理一下才能纯化另一种新的蛋白呢 请知道的大神指导一下吧 |
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 细胞生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 |
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3楼2012-06-28 23:40:00
路基亚的暴诞
金虫 (正式写手)
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2楼2012-06-28 22:32:15
dshlove
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【答案】应助回帖
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1949stone: MolEPI+1, 支持 2012-06-29 13:05:50
da_da: 金币+3 2012-06-29 18:52:50
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我觉得，首先你要先弄清楚你的目的，你是要清洗柱子还是要再生柱子。 我给你点建议啊： 1.平常清洗（每次使用后，就算下次用在不同蛋白纯化上也适用。） 先用500mM咪唑冲洗3-5个柱体积，然后立即用纯水平衡5个柱体积。 2.每月清洗（一个月或者使用15次左右，柱子载量有所下降时，记住是载量下降了，所以，你说的方法不是常规的清晰方法。） 0.2M NaOH 冲洗2个柱体积，室温放置一夜或37℃放置2h。再用纯水平衡至少5个柱体积。 3.挂镍再生（柱子堵塞，压力升高，载量显著下降时），这个就比较麻烦了，需要的话再给你。 |
4楼2012-06-29 10:07:18
