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amazingjunny

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化中Ni-NTA变紫色! 已有2人参与

纯化前用50mM Tris pH 8.5, 300mM NaCl, 4mM β-ME,30mM imidazole,Ni-NTA马上变成紫色,用相同成分但pH为7.4的buffer冲洗后紫色消失,所以应该不是还原剂的问题,填料的参数显示可在pH范围为3-12,很好奇是什么原因,求高人指点!多谢!
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amazingjunny

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 花雨渡飞仙 at 2013-12-18 13:59:12
你用的谁家的填料啊?

GE Ni sepherose fast flow
7楼2013-12-20 10:45:09
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查看全部 7 个回答

alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1,蛋白是否带颜色;2,可能是2-ME浓度比较高
2楼2013-12-09 17:38:20
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amazingjunny

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alarace at 2013-12-09 17:38:20
1,蛋白是否带颜色;2,可能是2-ME浓度比较高

谢谢,蛋白没有颜色,纯化前平衡,并没有上样……变紫色后我用同样组分(β-ME)浓度相同,只是pH变成了7.4,柱子就恢复了,难道是在碱性条件下β-ME还原性更强么?
3楼2013-12-09 19:47:52
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个是有点奇怪,楼主该检查一下试剂是否有问题,或者填料是不是正品
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
4楼2013-12-11 20:49:56
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