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zhangjie_924

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1717284
注册: 2012-03-26
专业: 蛋白质组学

[求助] NI 柱纯化重组蛋白无法洗脱是什么原因？已有4人参与

最近一直在做重组蛋白的纯化，8M盐酸胍（PBS稀释）变性，室温平衡40min,与NI柱结合1h ,灌柱，复性，梯度洗脱
，但跑不出想要的峰值，接收不到纯化的蛋白，后续又对盐酸胍变性液和NI柱WB检测，发现我的目的蛋白主要都在NI柱子上，而且出现重组聚集状态，在这里求助高手，如何解决蛋白结合ni柱，无法洗脱的问题，再有，蛋白聚集的原因是什么，如何解决，蛋白聚集是否是无洗脱的原因？谢谢啦

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1楼 2014-06-10 09:25:44

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pennchem

专家顾问 (正式写手)

专家经验: +21
BioEPI: 5
应助: 297 (大学生)
金币: 10831
散金: 65
红花: 28
帖子: 596
在线: 1115.9小时
虫号: 2139205
注册: 2012-11-21
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

降低pH值试试看，到6.8，不行，到6.5，同时加入咪唑。

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行至水穷处，坐看云起时

6楼2014-06-10 18:04:46

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