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zhangjie_924

新虫 (小有名气)

[求助] NI 柱纯化重组蛋白无法洗脱是什么原因? 已有4人参与

最近一直在做重组蛋白的纯化,8M盐酸胍(PBS稀释)变性,室温平衡40min,与NI柱结合1h ,灌柱,复性,梯度洗脱
,但跑不出想要的峰值,接收不到纯化的蛋白,后续又对盐酸胍变性液和NI柱WB检测,发现我的目的蛋白主要都在NI柱子上,而且出现重组聚集状态,在这里求助高手,如何解决蛋白结合ni柱,无法洗脱的问题,再有,蛋白聚集的原因是什么,如何解决,蛋白聚集是否是无洗脱的原因?谢谢啦
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zhangjie_924

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-06-10 09:36:53
具体洗脱步骤???

到处都是洗脱方法,我只关心我想知道的,蛋白聚集是什么原因,无法洗脱的原因有哪些?
3楼2014-06-10 09:40:05
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lpzl

木虫 (正式写手)

具体洗脱步骤???
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-06-10 09:36:53
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
复性失败导致蛋白聚集,
聚集的蛋白不溶于PBS溶液,
只能用8M盐酸胍洗脱下来,
不然你的Ni柱也没法再用了。
4楼2014-06-10 15:51:03
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么用PBS稀释  蛋白沉在柱子上啦  要全程变性条件
5楼2014-06-10 16:46:00
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