应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » NI 柱纯化重组蛋白无法洗脱是什么原因？
51/1返回列表
查看: 2542  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)

[求助] NI 柱纯化重组蛋白无法洗脱是什么原因？ 已有4人参与

最近一直在做重组蛋白的纯化，8M盐酸胍（PBS稀释）变性，室温平衡40min,与NI柱结合1h ,灌柱，复性，梯度洗脱
，但跑不出想要的峰值，接收不到纯化的蛋白，后续又对盐酸胍变性液和NI柱WB检测，发现我的目的蛋白主要都在NI柱子上，而且出现重组聚集状态，在这里求助高手，如何解决蛋白结合ni柱，无法洗脱的问题，再有，蛋白聚集的原因是什么，如何解决，蛋白聚集是否是无洗脱的原因？谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-10 09:25:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-10 18:04:46
降低pH值试试看，到6.8，不行，到6.5， 同时加入咪唑。

我的洗脱液是PH=5.8 0.5M的咪唑，您说的PH和咪唑是指哪部分？谢谢谢
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-11 12:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lpzl

木虫 (正式写手)
具体洗脱步骤？？？
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-06-10 09:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie_924

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-06-10 09:36:53
具体洗脱步骤？？？

到处都是洗脱方法，我只关心我想知道的，蛋白聚集是什么原因，无法洗脱的原因有哪些？
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-10 09:40:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
复性失败导致蛋白聚集，
聚集的蛋白不溶于PBS溶液，
只能用8M盐酸胍洗脱下来，
不然你的Ni柱也没法再用了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2014-06-10 15:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭