24小时热门版块排行榜    

查看: 2008  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增跑胶 已有2人参与

各位大虾,求助啦!
我用提取的RNA进行反转录,然后用所得的cDNA进行PCR扩增。分别扩增了3个基因,c-myc,β-actin和hTERT,其中c-myc和β-actin都可以跑出条带,只有hTERT没有条带,做了三次,结果都是空白,胶上什么都没有,这是怎么回事,问题出在哪呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-11 08:49:00
引物我看了下没有啥问题,你把退火温度做个梯度再看看能不能扩出来。要是还扩不出来那有可能HepG2不表达hTERT...

非常感谢您的帮助。
我从hepG2细胞中提取RNA,经反转录得到cDNA,然后PCR,反应条件是:94度 1min;(94度 30sec,55度 30 sec,72度 5min)*30个循环;72度 10min
hTERT F1 Tm=60.0度
          R1 Tm=61.9度
麻烦你帮我看看这个条件合适吗?

谢谢!
10楼2014-06-11 10:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
伊梦青lhq: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 学习了! 2014-06-11 10:39:41
你用的什么组织或细胞提的RNA?可能是引物出了问题?
2楼2014-06-09 18:30:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-09 18:30:28
你用的什么组织或细胞提的RNA?可能是引物出了问题?

HepG2 人肝癌细胞,其他的两个基因都可以跑出条带来的。
3楼2014-06-09 19:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 伊梦青lhq at 2014-06-09 19:43:20
HepG2 人肝癌细胞,其他的两个基因都可以跑出条带来的。...

检查一下引物的序列
4楼2014-06-09 20:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-11 04:54 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:23 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:12 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:54 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:59 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 22:39 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:45 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境,微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见