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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒酶切后没有任何条带是什么原因
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dxl727

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后没有任何条带是什么原因 已有1人参与

我提取质粒跑胶，大小应该是对的，做酶切验证，用的AscⅠ这个酶，可以把我的质粒切成3个片段，酶切1h，3h，12h都没有任何条带，用这个酶同时酶切我的另一个质粒，都很正常，而且我每次都用没有酶切的质粒和酶切的质粒同时跑胶，没有酶切的质粒有条带，酶切之后就什么都没有了，然后我又换了其他的酶（有该酶的酶切位点）做了酶切，结果也是什么条带都没有，质粒我重新提取之后做酶切结果也是一样，请大家帮我分析一下是什么原因，谢谢。
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1楼 2014-05-20 21:31:59
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
dxl727(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-13 16:35:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by dxl727 at 2014-05-21 10:51:34
你好，有图的。
第1个和第8个泳道为marker，第2个为入门质粒，第3,4,5泳道为入门质粒酶切产物，第6泳道为目的质粒酶切结果，什么带都没有，第7泳道为目的质粒稀释10倍后的跑胶结果。目的质粒用的是AscⅠ这个酶，第 ...

从你的描述和这个结果图，我猜测可能是你目的质粒的问题，你重新提取的质粒，有测浓度么？多少？然后280 260的比值是多少？我感觉可能是你的质粒提取失败。

虽然条带很亮，但是看起来并不像是质粒的。你也可以用你的目的质粒做个转化验证一下。根据转化的结果，大致可以判断出你质粒的浓度。

我建议你重新提取质粒，或者重新做连接，转化，再提取新的质粒，验证。
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dxl727
4楼2014-05-23 05:43:43
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dxl727

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-21 06:13:02
有图么？

你好，有图的。
第1个和第8个泳道为marker，第2个为入门质粒，第3,4,5泳道为入门质粒酶切产物，第6泳道为目的质粒酶切结果，什么带都没有，第7泳道为目的质粒稀释10倍后的跑胶结果。目的质粒用的是AscⅠ这个酶，第4泳道为AscⅠ酶切入门质粒的结果，很正常啊，所以证明酶没有问题啊。
质粒酶切后没有任何条带是什么原因
两个质粒酶切图5-17-1.jpg
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3楼2014-05-21 10:51:34
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dxl727

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-23 05:43:43
从你的描述和这个结果图，我猜测可能是你目的质粒的问题，你重新提取的质粒，有测浓度么？多少？然后280 260的比值是多少？我感觉可能是你的质粒提取失败。

虽然条带很亮，但是看起来并不像是质粒的。你也可以用 ...

我也怀疑是质粒有问题，我再重新转化一次看看，谢谢啦
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5楼2014-05-23 14:00:02
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
请问，，碱法提取 质粒后 可以 直接 酶切吗？  还需要什么 操作步骤吗？？谢谢
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12
6楼2014-06-13 15:05:00
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