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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒和目的片段
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒和目的片段 已有6人参与

将T载体与目的片段连接后，做阳性克隆有目的片段，但是将连接体用质粒提取试剂盒提取后，再跑电泳时，为什么最亮的条带介于T载体和目的片段之间？？不应该是载体和目的片段之和吗？

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1楼 2014-05-06 08:20:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-05-06 09:50:43
直接酶切后电泳就好了吗，干嘛那么纠结。也不知道你的目的片段是多大啊。你说的情况很正常，有时候提出的载体上会被蛋白吸附又或者质粒的构型发生改变导致直接跑胶看不出来啊。有时间就没切好了。...

关键是我的是兼并引物，没有酶切位点啊！

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潇潇杨雨125
6楼2014-05-06 10:59:11
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定你的目的片段克隆在载体里面了吗？你可以粗提一下质粒，然后用兼并引物验证是否有目的片段插入，有的话再用试剂盒精提跑电泳，顺便把粗提的质粒也点上
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-05-06 12:26:40
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普通回帖

飞飞fly

银虫 (正式写手)
飘过

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2楼2014-05-06 08:21:02
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA跑电泳和体积、长度有关系，可能是你所说的条带卷缩了导致比T载体短比目的长也或者提质粒过程中打断了，但这不可能？

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青山不断，绿水长流
3楼2014-05-06 08:27:35
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-06 08:27:35
DNA跑电泳和体积、长度有关系，可能是你所说的条带卷缩了导致比T载体短比目的长也或者提质粒过程中打断了，但这不可能？

直接酶切后电泳就好了吗，干嘛那么纠结。也不知道你的目的片段是多大啊。你说的情况很正常，有时候提出的载体上会被蛋白吸附又或者质粒的构型发生改变导致直接跑胶看不出来啊。有时间就没切好了。
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4楼2014-05-06 09:50:43
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-05-06 09:50:43
直接酶切后电泳就好了吗，干嘛那么纠结。也不知道你的目的片段是多大啊。你说的情况很正常，有时候提出的载体上会被蛋白吸附又或者质粒的构型发生改变导致直接跑胶看不出来啊。有时间就没切好了。...

嗯，说的很在理！
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潇潇杨雨125
青山不断，绿水长流
5楼2014-05-06 09:54:07
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2014-05-06 10:59:11
关键是我的是兼并引物，没有酶切位点啊！
...

你不是连得T载体吗？？  T载体上不是有好多酶切位点。
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8楼2014-05-06 14:26:33
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞飞fly at 2014-05-06 08:21:02
飘过

是不是因为T
载体是线性的？？

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9楼2014-05-06 17:09:30
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-05-06 14:26:33
你不是连得T载体吗？？  T载体上不是有好多酶切位点。...

用T载体上的酶来切吗？

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10楼2014-05-06 17:10:59
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